This manuscript describes clinical protocols for two next-generation sequencing panels. One panel interrogates hematologic malignancies while the other panel targets genes commonly mutated in solid tumors. Molecular classification of driver mutations in human malignancies offers valuable prognostic and predictive information.
As our understanding of the driver mutations necessary for initiation and progression of cancers improves, we gain critical information on how specific molecular profiles of a tumor may predict responsiveness to therapeutic agents or provide knowledge about prognosis. At our institution a tumor genotyping program was established as part of routine clinical care, screening both hematologic and solid tumors for a wide spectrum of mutations using two next-generation sequencing (NGS) panels: a custom, 33 gene hematological malignancies panel for use with peripheral blood and bone marrow, and a commercially produced solid tumor panel for use with formalin-fixed paraffin-embedded tissue that targets 47 genes commonly mutated in cancer. Our workflow includes a pathologist review of the biopsy to ensure there is adequate amount of tumor for the assay followed by customized DNA extraction is performed on the specimen. Quality control of the specimen includes steps for quantity, quality and integrity and only after the extracted DNA passes these metrics an amplicon library is generated and sequenced. The resulting data is analyzed through an in-house bioinformatics pipeline and the variants are reviewed and interpreted for pathogenicity. Here we provide a snapshot of the utility of each panel using two clinical cases to provide insight into how a well-designed NGS workflow can contribute to optimizing clinical outcomes.
임상 종양학 표본의 차세대 시퀀싱 (NGS)는 타겟팅 유전 적 변화와 예측 / 예후 분자 마커를 식별의 중요성에 과학 문헌 포인트를 성장으로 더 널리 사용할 수있는 지난 몇 년 동안이되고있다. 다중 유전자 패널 분석과 질병의 진행 및 재발로 두 상피 1, 2, 혈액 3 악성 종양의 전체 엑솜 시퀀싱 연구는 종양 이질성의 개념과 클론 진화를 응고있다. 또한, 이러한 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 또는 생거 시퀀싱 같은 경쟁 기술과 달리, NGS 번의 시험 4의 모든 임상 적 암 유전자의 대부분의 게놈 변화를 검출 할 수있다.
처음 두 개의 임상 NGS 패널, 사용자 정의 혈액 학적 패널 (헴-NGS 패널)와 기성 FFPE 표본에 대한 암 패널 (솔리드 NGS 패널)를 출시 맞춤 진단을위한 센터 (참조 <strong> 그림 1). 이 패널은 선택된 유전자의 임상 적 또는 높은 관심 영역을 커버; 모든 유전자 또는 엑손 완전히 덮여 없습니다. 증폭은 확장 및 결찰 다음 프로브 하이브리드 화에 의해 생성됩니다. 대상 지역은 추가 시퀀싱 풀링 할 96 샘플까지 허용, 보편적 인 듀얼 인덱스 프라이머와 PCR을 이용하여 증폭된다.
그림 1 :. 패널에서 해당 유전자의 목록 라이브러리 준비 사용하여 수행하거나 사용자 정의 혈액 학적 패널 (33) 유전자 또는 기성 앰플 리콘 암 패널 (47)의 유전자 (솔리드 NGS)의 (헴-NGS 패널). 유전자 또는 엑손의 모든 일부 증폭가 특정 핫스팟을 커버 할 수있다. 전체에 적용되지는 않습니다 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <가 />
헴-NGS 패널에 대한 내용은 여러 소스에서 유래하지만, 이전에 임상 적 유용성 5의 높은 수준을 보여주는 설명 급성 골수성 백혈병 (AML)에 돌연변이 16 유전자를 중심 하였다. 고체 NGS 패널은 상업적으로 (COSMIC) 데이터베이스 (6) 암에 체세포 돌연변이의 카탈로그에보고 된 암에서 일반적으로 돌연변이 유전자에 따라 대상 지역으로 생산된다.
몇 가지 주요 단계는 임상 NGS에 대한 전반적인 워크 플로우를 특징. 임상 테스트를 정렬 한 후, 병리학 종양 비율 및 샘플 볼륨에 대한 분석에 따라 시험편의 적절성을 결정한다. 우리 기관에서는 기술의 배경 시퀀싱 에러 레이트 ( "잡음")과 목표 접근의 효율성으로 인해 10 % 이상의 종양을 필요로한다. 조직 테스트에 적합한 경우, 게놈 DNA를 추출한다. 이 DNA 후 (복수의 품질 관리를 실시한다QC) 단계. DNA가 QC를 통과 할 경우, 앰플 리콘 라이브러리가 생성 순서가된다. 얻어진 데이터는 사내 정보학 파이프 라인을 통해 분석된다. 생물 정보학 분석에 따라, 변형 수동으로 검토하고 임상 보고서로 통합하기 전에 병원성에 대한 해석했다. 우리가 설명 아래 궁극적으로이 엄격한 워크 플로우를 통해 가서 두 가지 경우 임상 관리의 변화로 이끌어 냈다.
사례 1 – 급성 골수성 백혈병
환자 A로부터 골수 조직 검사는 성숙하지 않고, AML 진단했다. 유전 학적 연구는 골수 시편상에서 전송 및 정상 핵형 여성을 입증 하였다. 이 현재의 95 % 순환 폭발이었다, 그래서 말초 혈액 표본은 헴-NGS 패널의 맞춤 진단 테스트에 보내졌다.
급성 골수성 백혈병 (AML)은 백혈구의 골수 계통의 혈액 악성 종양이다. 검출재발 유전자 돌연변이 기전과 예후 7에서 중요하게 인식과 AML에서 유전자 변이의 예후 및 치료에 점점 더 중요 해지고있다. FLT3 내부 탠덤 중복 (ITDs에이) 덜 유리한 결과 8과 관련이있는 반면 NPM1과 CEBPA 돌연변이는 양호한 예후 위험과 관련이있다. 증거의 성장 몸은 AML 9 이들과 다른 돌연변이에 대한 병원성 역할을 지원합니다.
사례 2 – 폐 선암
환자 B에서 왼쪽 쇄골 대량의 조직 검사는 폐 선암을 보여주었습니다. 50 % 이상 종양 롤 / 컬은, 돌연변이가 대상으로 치료 적 개입의 존재 여부를 확인하기로 포르말린 고정 파라핀 포함 (FFPE) 림프절 질량에서 생검 재료는 게놈 테스트 (솔리드 NGS 패널)을 위해 보내졌다.
폐 cancER은 미국의 암 관련 사망의 주요 원인이며, 두 가지 유형의 비 – 소세포 폐암 (NSCLC) 및 소세포 폐암 (SCLC)로 분할된다. NSCLC는 또한 병변의 조직학에 기초 선암 또는 편평 세포 암종로 정의 될 수있다. 폐 선암종 흡연자와 비 흡연자 모두에서 가장 흔한 폐암 서브 타입이며, 비 흡연자 10 폐암의 가장 흔한 형태이다. 폐 선암의 분자 연구는 여러 종양 유전자 (11)에 돌연변이를 확인했다. 흡연자에서 식별 된 가장 일반적인 드라이버 돌연변이 KRAS 및 BRAF 돌연변이이다. 비 흡연자에서 가장 일반적인 돌연변이 EGFR의 돌연변이와 유전자 ALK, RET와 ROS1을 포함하는 재 배열입니다. 폐 종양 유전자 ERBB2에서의 프레임 삽입 엑손 20 (HER2 / NEU)으로 설명되었다. HE에서 가장 일반적인 이상R2 / NEU는 표적 치료 (: HER2 / NEU에 대한 인간화 단클론 항체 트라 스투 주맙)이 사용할 수있는 유방암에서이 궤적의 증폭이다. 이 관찰되는 HER2 / neu의 엑손 20 삽입 – 폐의 4 %는 12 (각각 네 라티 닙과 temsirolimus) 13 HER2 / neu의과 mTOR의 억제제와 병용 요법에 부분적 반응을 보였다 adenocarcimomas.
이 논문에서 설명 된 두 NGS 시험은 임상 적으로 제공되는 바와 같이 가장 중요한 실제적인 고려 사항은 품질 관리된다. 특히, 가까운 고려 사항은 품질과 추출 된 DNA의 양에 지불해야합니다. 이것은 종종 변수 DNA 수율이 매우 저하되어 FFPE 샘플에 특히 중요하다. 이소프로판올 침전 법 컬럼 – 기반 방법은 때때로 제한 용출 부피와 DNA 전단 이어질 것으로 나타났다로 FFPE 시료로부터 DNA 수율을 최대화하기 위해 개발되었다. 따라서, 검체가 너무 낮은 농도를 산출하거나 분석 너무 저하되는 대부분의 시간 인한 조직의 크기, 형태 또는 고정이 아닌 추출 처리에 가장 쉽다. 추출 오류가있는 경우 혈액 / 골수 시험편 들어, 인해 샘플 인 hemodilute 통상 (즉, 백혈구 또는 종양이 연신 세포의 충분한 수가 갖지 않는) 절제 또는 항암 치료.
. 검증 동안 NT "는> DNA의 질과 양의 수용성에 대한 단절을 확립한다 (100)의 추천 입력 – 250 NG들은 상기 분석에 사용되는 상기 DNA의 품질이 좋은 경우에는 다음 낮은 입력 양이 성공적 일 수있다. (증폭 DNA의 양이 권장 된 입력에 도달 할 것이기 때문에)을 높은 입력 양 시퀀싱 결과의 품질을 향상시킬 수있다 – DNA의 품질이 나쁘면 또한 (NG (250) 즉, 증폭 DNA 양은 적은 100 초과) . DNA의 품질과 수량에 대한 메트릭 라이브러리 준비에 DNA를 진행하기 전에 각 시료에 적용해야합니다. 그 샘플에 "회색 지대"(그림 2 참조)는 연구소 책임자 또는 지정 인의 재량에 따라 실행해야합니다. 현재 가장 DNA가 서열 중에 잘 수행하지 않을 경우 예측하는 방법은 입력 된 DNA의 정량, 품질 평가를 허용하는 qPCR에 기반 분석을 수행하는 것이다.이 방식은 bioavailab을 해결다른 크기의 조각 (예를 들어, 100 bp의 150 bp의 200 bp의 300 bp의)와 비교 수율의 증폭을 통해 표본의 크기가 다른 조각의 ility.현재 라이브러리 준비는 몇 가지 고비 중 하나에서 실족 라이브러리에 오류가 있거나 품질이 좋지 질 수 있습니다 수동 단계의 큰 숫자를 포함한다. 마이크로 유체 겔 분석은 시퀀싱 전에 라이브러리 준비 문제를 확인하는 유일한 QC 공정이다. 따라서, 여분의 마음 챙김은 성공적인 반응의 확률을 높일 수있는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 올바른 샘플 올리고 뉴클레오티드 풀 각 시험편에 사용되는 보장 필수적이다. 보장과 제대로 각 샘플은 듀얼 인덱스 PCR 프라이머 쌍 중 하나 (96)의 고유 한 조합을 포함 기록은 샘플 믹스 업에 대한 가능성을 줄일 수 있습니다. 또한, 필터 판 (FPU)를 올바르게 배수되도록하는 것이 중요하다; 이 적절하게 배출하지 않을 경우이는 exte을 일으킬 수 있습니다라이브러리 준비 nsion 결찰 단계는 suboptimally 수행하고 품질이 좋지 시퀀싱 데이터로 이어질 수 있습니다. 라이브러리 QC 후에는 LNB1 비드가 완전히 현탁되도록하는 것이 중요하고 LNB1 / LNA1 용액 혼합물의 농도는 라이브러리의 몰 농도를 결정하는 데 사용되는 샘플에 첨가하기 전에 잘 혼합된다. 비드 용출 단계는 비드를 용출 라이브러리의 최적 량 시킨다면 마지막으로 클러스터링 밀도를 감소 할 가능성이 라이브러리는 평균 충분한 커버리지를 획득하지 않는 원인이된다. 반대로, 도서관의 과잉은 품질이 좋지 읽기에 이어질 것입니다. 따라서, 시퀀서 라이브러리 최적 풀링 및 클러스터링을 할 수 있도록 비드 기반 정규화 단계에서 일치하는 것이 중요하다.
라이브러리의 제조뿐만 아니라, 그 원료, 역 다중화 fastq 파일의 정확한 돌연변이 호출을 생성하는 생물 정보학 파이프 라인을 확인하는 것이 중요하다. 선택하나를 통해 선별해야 할 것이다 많은 오픈 소스와 시판 얼 라이너, 변형 발신자 및 NGS 소프트웨어 패키지 있기 때문에 사용자 정의 솔루션은 많은 시간이 소요될 수 있습니다. 맞춤 알고리즘은 필수적 성능 통계를 추출 대부분 오픈 소스 도구를 회피 고유 반복 돌연변이를 식별하고, 각각의 궤적 위에 카피 수의 상태를 결정하도록 설계 될 필요가있다. 생물 정보학 파이프 라인의 검증 프로세스 동안, 충족 또는 품질 여과 후 따르면 최소 깊이 (예, (250)의 최소 판독) 및 최소 대립 유전자 빈도를 모두 초과 변이체에 대한보고 단절을 결정하는 것이 중요하다 (예를 들어, 4 %). 이 다중화 된 앰플 리콘 기반 분석하기 때문에, 그 최소 범위의 평균 깊이를 결정하는 것이 중요하다 (예를 들면, 1000 배) 라이브러리의 읽기의 최소 깊이까지 최저 수행 앰플 리콘을 얻을 수있게 달성 할 필요가있다. 또한, 분석의 다중 특성은 C를 수행ause 오프 대상 효과와이 '유물'발견 완전히 실행하기 전에 심사해야합니다. 기재된 분석 또 다른 중요한 한계는 유효 최소 대립 유전자 빈도를 얻기 위해서는 10 % 이상의 종양을 포함하는 샘플이 필요하다.
저주파 1 %, FLT3 삽입의 검출은 수동 검토를 여전히이 과정에서 바람직하다고 증거이다. 심지어 5 %의 대립 유전자 주파수 차단과 함께, 몇 가지 중요한 돌연변이는 아마 놓친 때문에 수동 검토는 이러한 변형을 확인하는 것이 필수적 일 것이다. FLT3-ITDs에 들어, 엑손 (14)의 육안 검사가 주목하지 않는 로우 레벨 혹은 큰 삽입 / 복제를 위해 모든 AML 환자에 대해 수행된다. 또한, 일반적으로 프라이머 서열 옆에있는 HER2 엑손 (20) 삽입은 수동 개입이 필요합니다. 강력한 생물 정보학 파이프 라인을 가지고에도 불구하고, 일부 변종은 하드 컷을 갖는 단지 성격 인 간과 갈 수있다대부분의 통계는 위에서 언급 한 오프. 더 나은 생물 정보학은이 문제를 완화하기 위해 필요한 것 같은 것보다 도서관 준비 및 / 또는 시퀀싱 방법, 그것은 더 적은 유물과 오탐 (false positive)를 포함하는 더 낮은 컷오프에서 양질의 데이터가 더 유리하기 때문이다.
탐지 및 대립 유전자 주파수 해석에 의한 종양의 백분율을 결정하고, 게놈의 일부 영역의 증폭 바이어스 곤란하기 어려울 수있다. 이는 이형 (LOH) 이벤트의 손실로 해석되는 케이스 (2)의 관찰뿐만 아니라, 50 % 이상의 대립 유전자 빈도가 돌연변이의 명백한 증가로 이어지는 어느 인해 정상 대립 유전자의 손실을 검출 할 수는 읽는 돌연변이 대립 유전자 (예를 들어,이 돌연변이와 하나의 정상 사본) 또는 다른 메커니즘의 이득. 이러한 메커니즘은 배열 비교 게놈 혼성화 (aCGH 19) 및 / 또는 SNP 유전자형 어레이를 이용하여 설명 될 수있다. (20).
현재 대상 농축 방법은 더 시퀀싱 단일 샘플의 범위와 대상 시퀀싱 읽기 오프 더의 필요성이 발생할 비효율적 인 하이브리드 캡처 또는 다중 PCR 기법 중 하나의 전일 절차에 의존하고 있습니다. 가까운 장래에 기대 NGS 분자 종양학 추가 애플리케이션이 완전히 오토메이션하고 입력 DNA의 매우 낮은 양의 샘플을 처리 할 수있다 쉽게 라이브러리 제조 방법을 포함한다 (즉, 1 NG 미만)과 샘플 높은 분해로 DNA. 이러한 문제를 해결하기 위해, 대부분의 방법은 아마도, PCR 기반이 될 것 중 하나 다단계 PCR 방법 또는 대규모 병렬 싱글 브레이크 PCR 방법을 주도했습니다. 또한, 각각의 증폭 분자 바코드 대폭 배경 시퀀싱 소음의 저감을 도시 한 하부 대립 유전자 빈도를 달성 circulat 캡처를 향해 이동하는 종양 세포의 낮은 비율로 샘플을 테스트 할 수있게종양 세포를 보내고.
암 표본에서 질병 관련 돌연변이의 검출은 수십 년 동안 치료의 표준이되어왔다. 역사적으로, 유전자는 종종 테스트 시퀀스의 끝 선도 돌연변이의 식별로, 한 번에 연속적으로 한 유전자 / 엑손을 시험 하였다. NGS의 출현은 종양과 관련된 다수의 돌연변이의 식별에 이르는 병렬로 많은 암과 관련된 여러 유전자 시퀀싱에 덜 편향된 접근 허용했다. 암 체세포 돌연변이 검출 용 NGS의 임상 적 유용성이 더욱 명백하다. 사실상, 종양 샘플 NGS 기반 분석은 기존의 단일 유전자 테스트 도전 새로운 패러다임을 나타내고 있지만 임상 적 유용성은 매우 명백하다. 임상 실험실 오늘이 강력한 기술의 응용 프로그램과주의 방법 검증 및 시험 해석을 결혼 할 수있는 흥미로운 기회를 가질 수있다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 생산에 원고와 도움이 읽어 다니엘 야생의 도움을 인정하고 싶습니다.
Genomic DNA ScreenTape | Agilent Technology | 5067-5365 | |
Genomic DNA Reagents | Agilent Technology | 5067-5366 | |
High Sensitivity D1000 ScreenTape | Agilent Technology | 5067-5584 | |
High Sensitivity D1000 Reagents | Agilent Technology | 5067-5585 | |
TapeStation 2200 | Agilent Technology | G2965A | |
TapeStation Analysis Software | Agilent Technology | A.01.04 or higher | |
96-well Tube Storage Racks | Any Vendor | ||
15/50 ml Tube Rack | Any Vendor | ||
96-well Plate Rack | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 0.5–2.5 μL | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 1–10 μL | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 2–20 μL | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 10–100 μL | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 20–200 μL | Any Vendor | ||
Pipette, single-channel, 100–1000 μL | Any Vendor | ||
Serological Pipettor | Any Vendor | ||
Vortexer | Any Vendor | ||
Ice bucket | Any Vendor | ||
Microcentrifuge (for tubes and strip tubes) | Any Vendor | ||
Freezer, -20 °C | Any Vendor | ||
4 °C Refrigerator | Any Vendor | ||
Water or Bead Bath | Any Vendor | ||
Incubator (37 oC) | Any Vendor | ||
Serological Pipettes, 1 mL | Any Vendor | ||
Serological Pipettes, 5 mL | Any Vendor | ||
Serological Pipettes, 10 mL | Any Vendor | ||
Serological Pipettes, 25 mL | Any Vendor | ||
Gloves | Any Vendor | ||
Razor Blades/Scaples | Any Vendor | ||
KimWipes | Any Vendor | ||
15 mL Conical Tube | Any Vendor | ||
50 mL Conical Tube | Any Vendor | ||
Paper Towels | Any Vendor | ||
200 proof Ethanol | Any Vendor | Store in Flammable Cabinet | |
2-Propanol (Isopropanol) | Any Vendor | Store in Flammable Cabinet | |
25ml Reservoirs | Any Vendor | ||
10N NaOH | Any Vendor | ||
Pipette, 8-channel, 1–10 μL | Any Vendor | ||
Pipette, 8-channel, 10–100 μL | Any Vendor | ||
Pipette, 8-channel, 20–300 μL | Any Vendor | ||
Ice Bucket | Any Vendor | ||
Water Squirt Bottle | Any Vendor | ||
Alcohol Squirt Bottle | Any Vendor | ||
Lens Cleaning Paper | Any Vendor | ||
Plates, 96-well PCR, Semi-Skirted | Any Vendor | ||
Tube strips, 8-well, 0.2 mL | Any Vendor | ||
Agencourt AMPure XP Beads | Beckman Coulter | A63881 | |
BioShake IQ or 3000-T elm | Bulldog Bio/Q.Instruments | 1808-0506/ 1808-0517 | |
DropPlate96 S – LabChipDS | Caliper | 128876 | |
DropPlate96 D – LabChipDS | Caliper | 132848 | |
DropSense96 | Caliper (Trinean) | ||
DropQuant Software | Caliper (Trinean) | ||
Plate Sealing Film | Denville | B1212-5S | |
Aluminum Seal Foil | Denville | B1212-6S | |
Nuclease-Free, Pure Water System | EMD Millipore | ||
5424 centrifuge | Eppendorf | 22621408 | |
5804R centrifuge | Eppendorf | 22623508 | Both 15 ml tube and plate rotators, preferably a centrifuge that can go up to 2,500 x g. |
Safe-Lock Tube 1.5 mL, Natural | Eppendorf | 22431021 | |
5 mL Tube, DNA LoBind Tube | Eppendorf | 30108310 | |
5430R Centrifuge | Eppendorf | 022620645 | Any plate rotator centrifuge will work |
Hybex Microsample Incubator | Fisher Scientific | 1057-30-0 | |
Hybex 0.2 mL Tube Block | Fisher Scientific | 1057-31-0 | |
TruSeq Amplicon – Cancer Panel | Illumina | FC-130-1008 | 96 reactions |
TruSeq Custom Amplicon | Illumina | PE-940-1011 | 96 reactions |
TruSeq Custom Amplicon Index Kit | Illumina | FC-130-1003 | 96 Indices, 384 Samples |
MiSeq Reagent Kit v3, 500 Cycles | Illumina | MS-102-3003 | |
MiSeq Reagent Kit v2, 300 Cycles | Illumina | MS-102-2002 | |
MiSeq Reagent Kit v2, 500 Cycles | Illumina | MS-102-2003 | |
Experiment Manager | Illumina | 1.3 or higher | |
MiSeq Reporter | Illumina | 2.0 or higher | |
Sequencing Analysis Viewer | Illumina | 1.8 or higher | |
TruSeq Index Plate Fixture and Collar Kit | Illumina | FC-130-1007 | |
MiSeq v2 | Illumina | SY-410-1003 | |
TruSeq Custom Amplicon Filter Plate | Illumina | FC-130-1006 | |
Index Adapter Replacement Caps | Illumina | 11294657 | |
Qubit 2.0 | Invitrogen | Q32866 | |
Qubit 0.5 ml Tubes | Invitrogen | Q32856 | |
Qubit dsDNA Broad Range Assay Kit | Invitrogen | Q32853 | |
DynaMa6-96 Magnetic Stand, Side Skirted | Invitrogen | 120.27 | |
GeneAmp PCR System 9700 (gold/silver block) | Life Technologies | N8050200 | |
Gentra Puregene Blood Kit | Qiagen | 158489 | |
Deparaffinization Solution (16ml) | Qiagen | 19093 | |
Buffer ATL (4x50ml) | Qiagen | 939011 | |
Protein Precipitation Solution (50 ml) | Qiagen | 158910 | |
DNA Hydration Solution (100ml) | Qiagen | 158914 | |
Glycogen Solution (500 μl) | Qiagen | 158930 | |
Qiagen Proteinase K | Qiagen | 19133 | |
Rnase (5ml) | Qiagen | 158924 | |
Nuclease-Free Water (10 x 50 ml) | Qiagen | 129114 | |
Pestles | USA Scientific | 1415-5390 | |
TipOne RPT 10 ul elongated filter pipet tips in sterilized racks, 10 racks of 96 tips (960 tips). | USA Scientific | 1180-3810 | |
TipOne RPT 100 ul natural, beveled filter pipet tips in sterilized racks, 10 racks of 96 tips (960 tips) | USA Scientific | 1180-1840 | |
TipOne RPT 200 μl natural, beveled filter pipet tips in racks, sterilized racks, 10 racks of 96 tips (960 tips) | USA Scientific | 1180-8810 | |
TipOne RPT 20 μl natural, beveled filter pipet tips in racks, sterilized racks, 10 racks of 96 tips (960 tips) | USA Scientific | 1180-1810 | |
TipOne RPT 1000 μl natural, graduated XL filter pipet tips in | USA Scientific | 1182-1830 |