This report provides a detailed description of transplanting murine thymi from different aged donor mice under the kidney capsule of immunodeficient mouse recipients. The goal of this approach is to model T cell development and thymic selection events in vivo.
胸腺選択の有効性を制御する機構は不明確なままです。ここで紹介する方法は、自己と外来抗原に特異的なT細胞の開発および選択の分析、in vivoで可能にします。アプローチは、免疫不全SCIDレシピエントに様々な高齢のマウス由来の胸腺移植片の移植を必要とします。比較的短い期間にわたって受信者は、完全に移植胸腺移植片由来T細胞で再構成されています。唯一の胸腺細胞の分離時に胸腺を播種すると、選択を受け、成熟T細胞へと発展します。このように、年齢依存性胸腺イベントの関数として移植T細胞の性質および特異性の変化を評価することができます。技術的専門知識が成功した胸腺移植のために必要とされていますが、この方法は、 生体内に起因する病態の広い範囲または異常な胸腺機能および/ またはhomeostasの結果を研究するためのユニークな戦略を提供しますです。
胸腺は、T細胞の発達における重要なイベントが1を発生する器官です。レジデント胸腺細胞は、T細胞受容体(TCR)αおよびβ遺伝子の再編成時に、胸腺2の皮質と髄質の地域でlymphostromalと抗原提示細胞(APC)との相互作用のシリーズを受けます。胸腺正の選択は、宿主の主要組織適合遺伝子複合体(MHC)クラスIおよびII分子2-3との関連で抗原性ペプチドを認識する胸腺細胞を産生するために、皮質胸腺上皮細胞(TEC)によって媒介されます。その後の胸腺のネガティブセレクションは、髄TECまたは樹状細胞(DC)、MHCクラスI及びII分子によって結合された3自己タンパク質に由来する本発明のペプチドとの相互作用によって駆動される自己反応性胸腺細胞のパージを伴います。これらのプロセスの最終結果は、広いスペクトルに対応することができ、成熟CD4 +およびCD8 + T細胞のプールの確立であります外来抗原の自己タンパク質4に最小限の反応性を示しながら。
胸腺選択イベントの効率は胸腺成熟、髄質および皮質TEC、胸腺のDCのサブセット組成の頻度、および胸腺前駆体3の源を含む因子の宿主によって影響されます。特に、異常な胸腺選択は、それぞれ、自己免疫5または損なわ正または負の選択から生じる免疫不全の病態をもたらすことができます。胸腺選択を調節する分子のイベントは、しかし、よく理解されていない。 インビトロでは 、このような再凝集胸腺器官培養(RTOC)6のように近づき、胸腺選択に関連する基本的な事象を分析するために有用であるが、完全には進行中のダイナミクスを再現することができないことが証明されています生体内のイベントで 。その結果、この胸腺移植ベースのアプローチは、インビボ 7 でより良い研究の胸腺細胞選択イベントに設立されました</s>アップ。
このプロトコルは、免疫不全SCIDレシピエントマウスに新生児と成人ドナーマウスから胸腺を移植について説明します。この技術は、正および負の選択胸腺、ならびに個体発生中の様々なT細胞サブセットの胸腺の出力を調節する機構の研究を可能にします。最近、このアプローチは、胸腺選択の効率は、初期の自己反応性T細胞の増加した開発、および外来抗原7に特異的な減少T細胞レパートリーをもたらすマウスにおいて生後限定されることを実証するために使用されています。
Events regulating thymic selection are poorly understood. Recent studies have demonstrated ontogenic changes in the efficiency of selection. Coupling this approach with different transgenic thymus donor and recipient mice will further facilitate studies to identify the events and parameters that regulate thymic selection. Notably, thymic transplantation is used for the treatment and management of T cell and thymic disorders seen for instance in athymic infants lacking functional T cells and in patients with DiGeorge synd…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by funding received from the National Institutes of Health (1R01AI083269).
Ethanol | Decon Laboratories | 2705HC | |
PBS | GIBCO | 14190-144 | pH 7.2 |
Betadine Solution | Purdue Products | 67618-150-17 | |
18 gauge needle | BD | 305195 | |
Sutures (1.0 metric) | Ethicon | J493G | 18" (45cm) |
AUTOCLIP Wound Clips (9mm) | Clay Adams® Brand | 427631 | |
Transfer pipette | Fisher Scientific | 13-711-20 | Sterile, disposable |
Mouse anti-CD3 Ab | eBioscience | 11-0031-85 | Clone: 1452C11 |
Mouse anti-CD4 Ab | eBioscience | 48-0042-82 | Clone: RM4-5 |
Mouse anti-CD8 Ab | eBioscience | 25-0081-82 | Clone: 53-6.7 |
Lancet | Medipoint | Goldenrod 4mm | |
Pacific Orange Succinimidyl Ester, Triethylammonium Salt | Invitrogen | P30253 | |
96-well round botton polypropylene plates | Corning | 3365 | |
1.2mL polypropylene cluster tubes | Corning | 4401 | |
5mL polypropylene round-bottom tubes | BD | 352002 | |
40uM Nylon Cell Strainer | Falcon | 352340 | |
16% Paraformaldehyde Solution, EM Grade | Electron Microscopy Services | 15710 | Hazardous |
Puralube Optical Ointment | Fisher Scientific | NC0138063 | |
Lympholyte | Cedarlane | CL5030 | |
60 mm cell culture dish | Corning | 430196 | 60mm x 15mm, Sterile |