Here we demonstrate the use of a wireless enabling technology for electroencephalogram (EEG) in neonatal rodent models of human disease. With telemetry, there are no encumbering connections, thus allowing natural behaviors.
מחלות רבות מתקדמות נוירולוגית בבני אדם, כמו אפילפסיה, דורשות מודלים של בעלי חיים פרה-קליניים המתפתחים לאט המחלה על מנת לבדוק התערבויות בשלבים שונים של תהליך המחלה. מודלים של בעלי החיים אלה הם קשים במיוחד ליישום במכרסמים לא בוגרים, אורגניזם מודל קלאסי למחקר במעבדה של הפרעות אלה. EEG מתמשך הקלטה במודלים של בעלי חיים צעירים של התקפים והפרעות נוירולוגיות אחרות מהווה אתגר טכני בשל הגודל הקטן הפיזי של מכרסמים צעירים ותלותם בסכר לפני הגמילה. לכן, יש צורך ברור לא רק לשיפור מחקר פרה-קליני שיהיה טוב יותר לזהות את אותם הטיפולים מתאימים לתרגום למרפאת, אלא גם צורך במכשירים חדשים מסוגלים להקליט EEG המתמשך במכרסמים לא בוגרים. כאן אנו מתארים את הטכנולוגיה מאחורי ולהדגים את השימוש של מערכת טלמטריה זעירה רומן, במיוחד מהונדס לשימוש בחולדות בוגרות oעכברי r, שהוא גם יעיל לשימוש בבעלי חיים מבוגרים.
המבוגר ביותר – ועדיין בשימוש נרחב ביותר – הטכניקה להקלטת biopotentials במוח הוא אלקטרואנצפלוגרם (EEG). הוא משמש קליני להפרעות נוירולוגיות, כולל זיהוי התקף 1, לוקליזציה של תפיסת מוקדים 2, ואבחנה של זעזוע המוח 3,4. טכניקה זו גם בשימוש נרחב כדי לספק מידע בסיסי על המנגנונים של שינה ולאבחן הפרעות שנת 5,6.
כמו באבחון הקליני של אפילפסיה, EEG הפך חיוני למחקר translational במודלים של בעלי חיים של שניהם אפילפסיה הגנטית ונרכשת. ביישומי מחקר הנוכחיים, "קווית" או הקלטות "קשורות" הן סטנדרטיים, ומבוצעות באופן שיגרתי במכרסמים מבוגרים במשך שבועות בכל פעם 7. עם זאת, רעש חשמלי, חפצי תנועה, ואת הסיכון שקשור בעלי חיים יפגעו בעצמם על ידי משיכת הכבל יש לי compr הארוךomised ניסויים אלה. לכן, כדי לשפר את תנאי ניסוי ושיעורי הצלחה, אנחנו צריכים לפתח טכנולוגיות חדשות שתאפשר לחיסול ממשק קווי בין בעלי החיים והמכשור. האזור הבולט ביותר של פיתוח הוא תכנון ויישום של מערכות טלמטריה המאפשרת להקלטות באיכות גבוהה, תוך שמירה על חיים ארוכים שימושיים ומזעור אי נוחות לנושאי בעלי חיים. הקטנת הגודל הפיזי של התקנים אלה תאפשר מחקר translational במודלים של מכרסמים בילוד ונוער של הפרעות נוירולוגיות.
הקלטות EEG נמוכות ערוץ-ספירה בחולדות מועסקות בהרחבה לפתח טיפולים חדשים לדיכוי התקפים אפילפטיים מסוגלים תרגום לבני אדם. הקלטות מאתר אחד או יותר לתקופה ממושכת לפתוח אפשרויות רבות לשימוש במודלים של מכרסמים של אפילפסיה במחקר translational. חלק גדול מהמחקר העכשווי בתחום זה נועד לחסום את המופע של seiz הכרוניures או הפיתוח של אפילפסיה (epileptogenesis כלומר,), ומאמצי מחקר כזה דורשים נרחבים אם ניטור EEG לא רציף לassay את האפקטיביות של הטיפול המוצע 8; מערכת קטנה, פשוטה, telemetric עם אחד, שתיים, או ארבעה ערוצים הפועלים בין .1-100 הרץ לכל ערוץ תהיה בתוקף לקדם סוג זה של מחקר translational. התקפי Electrographic מתרחשים לעתים קרובות עם התנהגויות מינימליות (ובוודאי ללא פרכוסים), אשר מגבילה את השימושיות של מבחני מבוססים על התקפי התנהגות. האסטרטגיה של שילוב הקלטת EEG וניטור וידאו בו זמנית מאפשרת את האפשרות של לכידת כל תפיסה; ויתר על כן, גישות אנליטיות אלה עשויות לאפשר הערכה כמותית של הקוצים interictal המתרחשים במוח אפילפסיה בין "ictal" (או תפיסה) אירועים 9. יתר על כן, היכולת להשיג הקלטות EEG נמוך חפץ באיכות גבוהה רציף, שלטכנולוגיה האלחוטית היא בדרך כללמעולה, יאפשר לפיתוח של שימוש באלגוריתמים מבוסס מחשב ללימוד צורות גל ספציפי EEG (למשל, תטא, גמא), כמו גם זיהוי אוטומטי של התקפים, הפחתת עומס העבודה של הניסוי באופן משמעותי.
המודל פרה-הקליני הראשוני ללימוד אפילפסיה כרונית לאחר פגיעה מוחית הוא העכברוש המבוגר או עכבר, או באמצעות כימותרפיה-convulsant (כלומר, חומצה או pilocarpine kainic) או סטטוס אפילפטיקוס המושרה חשמלי (SE), שאחריו אפילפסיה כרונית. בתנאים אלה, פרכוסים החמורים הקשורים SE או ההתקפים הבאים בבעלי החיים אפילפסיה יכולים להוביל לפגיעה מבעלי החיים או הקריעה מושך ברצועה ושחרור הברגים שלשמור את הקובץ המצורף של headcap. סופו של דבר, זה בעיה, כי בדרך כלל זה מסתיים ניסויים אלה, ובכל זאת הצורך בקבלה רשומות EEG ברזולוציה גבוהה לטווח ארוך לניסויים במטרה לפתח טיפולים חדשים לכרוניאפילפסיה היא בעל חשיבות עליונה. בנוסף, דיור, ניטור, וניתוח הנתונים מבעלי החיים מושתלים לטווח ארוך היא השקעה ניכרת בשתי עלויות הישירות וזמן חוקר; לכן, סיום מוקדם של הניסוי יכול לגרום לעלויות משמעותיות לחוקרים. כמודלים של התקדמות אפילפסיה אלה, ההתקפים בדרך כלל הפכו תכופים יותר וחמורים יותר 10-12, ויגדילו את הסבירות שבעלי החיים נפגעו, בדיוק כפי שהתועלת שלהם לפיתוח טיפולים חדשים הופך הגדול ביותר. בעלי חיים אלה יכולים באופן שיגרתי לפתח עשרות התקפים עוויתי ליום, לעתים קרובות מתרחשים באשכולות 13.
כנראה אחת ההתפתחויות החשובות ביותר במדעים ביו-רפואיים היה השימוש בגן מיקוד במודלים של עכברים. גישה זו אפשרה, ותמשיך לאפשר, פיתוח מודלים של בעלי החיים של אפילפסיה גנטית שלשכפל תסמונות אדם בפועל 14-16. יכולות להתבצע מניפולציות גנטיות כטיפולי הוכחה של העיקרון לדכא התקפים אפילפטיים או אפילו לחסום את ההתפתחות של אפילפסיה לאחר פגיעה מוחית 17-20. סוג זה של מחקר ירוויח באופן דרמטי מהיכולת לבצע הקלטה רציפה תפוקה גבוהה של EEG. נכון להיום, ניתן להקליט מעכברים עם שתי מערכות קשורות או טלמטריה; עם זאת, האתגרים של קבלת באיכות גבוהה, הקלטות ללא חפץ הם באופן משמעותי יותר קשות מאשר חולדות, ולעתים קרובות זה דורש צורות שונות של תרמילים שעכברים ברציפות ינסו להסיר. מתח יכול להגדיל את חומרת התקפים, תדירות ו / או משך זמן, ובכך סופו של דבר לשנות את אפילפסיה של חיות ניסוי, כך בלבול המחקר. , מערכת קטנה, קל משקל פרופיל נמוך טלמטריה הזעירה תאפשר ההקלטה של הטווח ארוך EEG ממודלי עכבר גנטיים של מחלות בבני אדם.
בנוסף לבעיות שתוארו לעיל, הקלטת EEG במודל מכרסם בוגרים של מחלה יש סט הייחודי משלו אתגרים. בעלי חיים בוגרים יכולים לשקול קטן כמו 6 גרם (P8 עכבר) 17 גרם (עכברים P6). זה כמעט בלתי אפשרי לבצע הקלטות סידוריים רב היום קשורות EEG עקב מתח מוגבר מרצועה וחוסר היכולת לאפשר גידול טבעי של הגור על ידי הסכר. עד בעלי חיים נגמלים, הם חייבים להישאר בטיפול של הסכר. הסכר הוא נוטה להרוס כל הרכבה מחבר מוחץ על הגור, לסיים את הגור, ובמקרים מסוימים לסיים את כל ההמלטה. יתר על כן, הגולגולת המכרסם בוגרת מקשה על הר כל הדום אלקטרודה לגולגולת עם יושרה מכאנית. אתגרים אלה, ייחודיים למכרסמים לא בוגרים, דורשים פתרון חדשני לביצוע הקלטות electrographic טווח ארוך חזק,. כאן אנו מתמקדים בהוכחת ההשתלה וההקלטה של EEG באמצעות משדר אלחוטי זעיר רומן וניסויים הנוכחיים הוכחה של עיקרון שלוש דוגמאות לשימוש במערכת הזעירה האלחוטית טלמטריה: 1) imמודל גור חולדה בוגר של היפוקסיה-איסכמיה, 2) עכברים בוגרים שטופלו בDFP לגרום לסטטוס אפילפטיקוס והתקפים ספונטניים שלאחר מכן, ו- 3) מודל גנטי של מומים מחלה כלי דם אשר לגרום להתקפים ומוות בעכברים בוגרים.
מערכת טלמטריה האלחוטית הזעירה תוכננה כדי לענות על ארבע דרישות עיקריות: (1) השתלה כירורגית פולשנית; תאימות לדיור של גורי מכרסמים עם הסכר והמלטה (2); (3) צריכת חשמל נמוכה של היחידה, ובכך מאפשרת לחודשים של ניטור רציף ללא מחדש השתלה כירורגית; ו- (4) יכולת להקליט גל EEG באיכות גבוהה עם חפצי תנועה מינימאליים. משדר האלחוטי שוקל <0.6, 2.3, ו -4 G ו< 0.3, 0.8, ו -1.4 סנטימטר 3 תלוי בסוללה עם טביעת רגל של 5 x 7, 7 x 9, או 7 מ"מ x 12 שבקלות עולה לגולגולת של בעלי החיים עם ג'ל cyanoacrylate. אין צורך בעוגני בורג עצם להדביק היטב את המכשיר להגולגולת, צמצום מספר החורים שצריכות נקדחו בגולגולת וזמן הניתוח. המכשיר מסוגל הגברת שני ערוצים של EEG או פוטנציאלי שדה מקומיים ממבני מוח עמוקים, כמו בהיפוקמפוס, במשך 2 שבועות, 2 חודשים, או 6 חודשים בתצורה זו. הגודל הקטן של משדר האלחוטי מפחית סיכון לזיהום, מגביר את הניידות של בעלי חיים, וסופו של דבר מפחית את התחלואה ותמותה שאחרת מגדילה את הזמן, כסף, ומספר בעלי החיים הדרושים לניסוי. כל האלקטרוניקה והסוללה בעציצים באפוקסי הכיתה רפואית שהופך את המכשיר עמיד למים וקשים, המונע את הסכר מהלעיסה במכשיר אחר שעלולות להפוך את המכשיר לבלתי שמיש. בניגוד למשדרי רדיו תדר מערכת טלמטריה משתמשת צימוד קיבולי בין המשדר ומקלט אנטנה שיושבת מתחת לכלוב בעלי החיים, המאפשרים למשתמש לשמור על בעלי חיים בדיור מכרסמים סטנדרטיים. ערוצים מרובים של recording לאפשר ההקלטה של biopotentials רב מודלי, כגון רל ואלקטרו. מודלים של בעלי החיים של עמיתים נלווים ייהנו מהיכולת להקליט biopotentials בהתנהגות 21-23. שילוב עם ניטור התנהגות EEG יספק לחוקרים עם כלי טוב יותר למחקר ומחקרים פרה-קליניים.
זה יכול להיות מאוד יקר לבצע הקלטות electrographic לטווח ארוך בדגמים קטנה-חיה של מחלה. על ידי הסתמכות על מעגלים חשמליים פשוטים והדגשת צריכת הספק נמוך, הצלחנו ליצור מערכת משדר (איורים 1 ו -2) שמפחיתה את העלות של ניסויי ניטור ארוך טווח. העלות הכוללת של ניסוי ניטור 6 חודשים יכולה להיות נמוכה כמו 470 $, בתוספת העלות של בעלי החיים (~ 1.5 $ החיה אש"ל, $ 200 משדר). הגודל הקטן של המשדר מאפשר הקלטות רציפות ללא הפרעות electrographic בקטנים-בעלי חיים, מודלים פרה-קליניים של מחלה אנושית, אשר קשות מאוד להשיג עם מערכות מבוססות תדר רדיו קשור או אלחוטיות הקלטה (איור 4). לבסוף, הטבע רכוב הגולגולת של המשדר מפחית את זמן ניתוח ולחץ על בעלי החיים, כי אחר יכול להתפשר ניסוי. כאן, אנו מציגים ניסויי הוכחה של עיקרון משלושה הבדלמודלים erent ניסיוניים של התקפים: סביב הלידה היפוקסיה-איסכמיה 13, 27, 28 בגור חולדה (איור 4), אפילפטיקוס המושרה DFP מצב (איור 5) והתקפים במודל גנטי-induced של מומים לב וכלי דם העמוקים (איור 6).
אולי ההיבט הקריטי ביותר לקבלת הקלטות electrographic ללא חפץ, לטווח ארוך הוא כדי לוודא גישת אלקטרודה חסרת מעצורים לאזור בקליפת המוח של עניין (איור 4-6). זה כולל את האלקטרודה התייחסות / מכנה המשותפת. במיוחד קריטי הוא מצרף את המשדר לגולגולת ליישומי EEG אפידורל. במהלך תהליך זה, ניתן בטעות מעיל קצה אלקטרודות עם cyanoacrylate ניתנו האורך קצר מאוד של אלקטרודות. ציפוי אלקטרודות בcyanoacrylate יכול להחליש את אותות EEG או לחלוטין בודד אותם בתרחיש הגרוע ביותר. כמו כן, חוסר ב חיבור חשמלי טובetween התייחסות / מכנה משותף והמוח של החיה ימנע פעולה נכונה של מגבר ההפרש במשדר, וכתוצאה מכך חשמלי פלט אות "רועש". לעתים קרובות, לאחר ניתוח, יכולים להיות בסכנת אותות באיכות טובה עד 48 שעות בשל בצקת סביב החורים בר בגולגולת. כבצקת שוככת, אותות, בדרך כלל, לשפר. זה יכול להימנע על ידי הצבת אלקטרודות על פני השטח של הגולגולת בלי חורים בר. ההשלכות של תהליך זה גדלו פוטנציאל למעייל אלקטרודות עם cyanoacrylate, צמצמו פעילות בתדירות גבוהה בשל המאפיינים נמוכים לעבור החשמליים של עצם הגולגולת, והפוטנציאל לבודד את רעש התייחסות / מכנה המשותף טיוח באותות חשמלי. מיקום נכון תרגול של אלקטרודות ניתן לעשות עם פיסה דקה של עץ או פורניר המחקה את העובי של גולגולת העכבר או חולדה. התוצאות שהוצגו בכתב היד הזה ממחישות את קואהlity של הקלטות שניתן להשיג באמצעות טכנולוגיה אלחוטית טלמטריה.
השתלה כירורגית בשיטה המתוארת במסמך זה יכול לקחת קצת כמו 10 דקות, תלוי במורכבות של הניתוח. לגישה ניתוחית למבני מוח עמוקים, כגון אזור CA1 של ההיפוקמפוס, עדיף לצרף את המשדר לmicromanipulator רכוב על מסגרת stereotaxic. Micromanipulator יספק מנתח עם הדיוק להשתיל את המשדר לפי קואורדינטות stereotaxic פורסמו באטלס של עכבר והחולדה 29 30 המוחות. ניתן לעשות זאת פשוט על ידי tacking חתיכת צינור מזרק למשדר עם cyanoacrylate ולאחר מכן ההרכבה המזרק בmicromanipulator. שליטת micromanipulator של x, y, z וקואורדינטות תספק יציבות נוספת בעת התקנת משדר לגולגולת לפני תפירת העור סגור. התוספת של ברגי עצם סביב PErimeter של המשדר יכול לעזור לעגן את המשדר לגולגולת, למרות שהם לא הכרחיים. ברגי עצם יכולים להיות יעילים, לעומת זאת, בדגמים מסוימים של בעלי חיים של התקפי אפילפסיה ו, כגון חולדה הבוגרת שטופלה ליתיום-pilocarpine. בעלי חיים אלה נוטים להיות התקפים עוויתי ספונטניים עם פעילות מוטורית אינטנסיבית שעלולה לגרום נזק למשדר במהלך ההתקף. מורכבות נוספות ניתן להוסיף לניסויים אלה. לדוגמא, משדר תואם מודלים רבים ושונים של פגיעה מוחית טראומטית, כגון השפעת קליפת המוח מבוקר 31. העמידות של מכשיר משדר נבדקה על ידי השתלת חיות עם משדרים בP7, ולאחר מכן שיכונם במתקן בעלי החיים. לאחר 12 חודשים, רוב השתלים נותרו על כנן בגולגולת. כאשר בעלי החיים היו מורדמים, הגולגולות נראים נורמלי והמשדר היה מוטבע בעצמות הגולגולת, הדורש כוח משמעותי כדי לחלץ אותו. היזהר בעת מבני מוח עמוקים הם למדו; כמוח גדל, ואלקטרודות להישאר נייחות, עמדתו הסופית של אלקטרודות שניתן הייתה לצפות לשינוי. לטכניקות המתוארות כאן, אלקטרודות הוצבו בדרך כלל מעל הדורה, שאיפשר גם את המוח והגולגולת לגדול ולאלקטרודות להישאר בעמדות המקוריות שלהם. הגורם המגביל בכמה זמן ניתן להשתמש במשדר הוא בגודל הסוללה (כלומר עד שהסוללה נגמר).
עיצוב עצמאי מונוליטי (כלומר משדר מוטבע באפוקסי הקשה) של הדיור של המשדר משאיל את עצמו לשימוש עם גורים בוגרים שוכנו עם הסכר וההמלטה שלהם. לעתים קרובות, שיתוף דיור מושתל חיות עם תוצאות רצועות קווי בהרס של החומרה או קניבלים של הגורים מושתלים על ידי הסכר. הצורה החלקה דופן של המשדר מאפשרת להשתלה עם כמעט שום כשל חומרה או אובדן של גורים בשל קניבלים.
<p class = "jove_content"> תכנית שידור מצמידים קיבולי צריכת החשמל הנמוך במערכת זו משאילה את עצמו היטב לשימוש בתרחישים ניסיוניים רבים ושונים כגון מיקום בחממה בטמפרטורה מבוקרת או אפילו לשימוש עם מנגנונים ניסיוניים, כגון תאי plethysmography. כמו כן, את הצורה של אנטנת המקלט ניתן להשפיע כדי שתתאים בסביבות שונות בהתנהגות, כגון מגוון T-maze.The הגבוה של המשדר הוא רק כמה אינץ 'כמשדר חייב להיות מסוגל (זוג capacitively "כונן" ל) אנטנת המקלט ומסתמך על בעלי החיים ששוכנים בכליאת מכרסמים סטנדרטית או כלוב מתאים המכוסה בשטח אנטנת מקלט. המשדר פועל כקוטב אחד של שדה חשמלי ואילו גופו של בעל החיים משמש כקוטב אחר. השדה הוא כזה שאורינטציות מסוימות, כגון 90 מעלות מחוץ לשלב עם אנטנת המקלט, ייכשלו לנהוג אנטנת המקלט וכתוצאה מכך "לנשור". זוהי תופעה נדירה למדי. עבודה עתידית עם טכנולוגיה זו תאפשר הקלטה מבעלי חיים רבים באותו הכלוב שיפחית את עלויות עלייה למטוס ולאפשר לאינטראקציה חברתית. התפתחויות נוספות יהיו כרוכות בהגדלת מספר הערוצים, כולל טמפרטורה, וelectromyogram. העיצוב הנוכחי של המכשיר מספק רוחב פס, כי הוא מותאם לקידוד מחדש של להקות EEG קלאסיות, שאינה מתאים להקלטה של אדוות מהירות או תנודות בתדירות גבוהה. בעתיד, המכשיר יכול להיות שונה כדי להקליט את רכיבי תדר הגבוה של האות, אבל במחיר של חיי סוללה. סוגים שונים של מתמרים יכללו את לחץ דם ואת לחץ-נפח, ואפילו בנייה של הסדר אלקטרודה משדר לממדים למשתמש מסוים לפי קואורדינטות stereotactic של מבני המוח הרצויים.The authors have nothing to disclose.
עבודה זו מומנה באמצעות המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ R43 / R44 NS064661.
Sterile Surgical Gloves | Protective Industrial Products | 100-3201 PF | Power Free Sterile Latex Surgical Glove |
Scalpel Handle | FST | 10003-12 | |
Scalpel Blade #15 | FST | 10015-00 | |
Fine Scissors | FST | 14090-09 | |
Burr tool | Ram Products, Inc. | Microtorque II | |
Fine burr | FST | 19007-07 | |
Aneurism clip | ROBOZ | RS-5422 | |
Toothed Forceps | FST | 11022-14 | |
Cotton-Tipped applicators | McKesson | 24-103 | |
Needle Driver | WPI | 521725 | Olsen-Hegar Needle Holder |
Cyanoacrylate gel | Henkel | Loctite 4541 | |
Cyanoacrylate accelerant | Henkel | Loctite 7452 | |
Suture | Ethicon | Vicryl RB-1 J304 | |
Elecrocautery disposable | Bovie | AA01 | Fine Tip |
Surgical Tray | FST | 20311-21 | |
Epitel Receiver Base | Epitel Inc | N/A | |
Epitel wireless transmitter | Epitel Inc | N/A | |
Biopac digitizer | Biopac | MP-150 | |
PC-compatible computer |