Вся цитотоксичность крови для анализа (WCA) является цитотоксичности разработана путем включения технологии позиционирования клеток с высокой пропускной с флуоресцентной микроскопии и автоматизированной обработки изображений. Здесь мы описываем, как лимфома клеток, обработанных анти-CD20-антитела могут быть проанализированы в реальном времени в цельной крови человека, чтобы обеспечить количественный анализ клеточную цитотоксичность.
Живых клеток на основе цельной крови цитотоксичности (WCA), что позволяет получить доступ к временной информации от общего цитотоксичности клеток разработан с технологией позиционирования клеток с высокой пропускной способностью. Целевые группы населения опухолевых клеток сначала запрограммированы на иммобилизации в формате массива, и помечены зеленым флуоресцентным цитозольными красителей. После формирования массива клеток, антител препараты добавляются в сочетании с цельной крови человека. Пропидиум йодида (PI) Затем добавляют для оценки гибели клеток. Массив клеток анализировали с автоматической системой обработки изображений. В то время как цитозольный краситель этикетки целевых групп населения опухолевых клеток, PI этикетки мертвые населения опухолевых клеток. Таким образом, процент гибели клеток мишени рака может быть определена количественно путем подсчета количества выживших целевые клетки с числом мертвых клеток-мишеней. С помощью этого метода, исследователи могут получить доступ зависит от времени и зависимости от дозы цитотоксичности клеток информацию. не Примечательно, нет опасных радиохимические вещества используются. WCA представлены здесь была протестирована с лимфомой, лейкемией, и опухолевых клеточных линий твердых. Поэтому, WCA позволяет исследователям оценить эффективность препарата в весьма актуального экс естественных состоянии.
Последние достижения в области фармацевтической промышленности, привели к увеличению интереса к реализации конкретных идентификацию опухолевых клеток антителами и персонализированных методов лечения рака; Однако, несколько препятствий встречаются в процессе. Только 5% средств, которые обладают противораковой активностью в доклинической разработке лицензированы после показа достаточную эффективность в фазе II-III испытаний 1,2. Доклинические стратегии (как в пробирке и в естественных) субоптимальны как много примеров показали, что противоопухолевые препараты ведут себя по-разному в человеческий и на лабораторных животных, главным образом из-за их разных компонентов крови 3-5.
Для решения о необходимости противоопухолевого скрининга лекарственных препаратов платформы и обеспечить регистрацию точку перед экспериментами дорогостоящим животных и клинических испытаний, в целом человеческой крови цитотоксичность тест (WCA) предлагается для оценки эффективности противоопухолевого лекарства в более подходящей биологической средой.Весь анализ цитотоксичности в крови может быть использован для оценки реакции отдельных клеток с антителами и других лекарств-кандидатов в цельной крови человека.
WCA разрабатывается путем включения высокой пропускной технологии позиционирования клеток с высокой пропускной и высокого содержания изображений 6. При использовании автоматизированной системы формирования изображения, количество живых и мертвых клеток может быть определена с высокой степенью точности. В связи с тем, что клетки-мишени, иммобилизованным на одной и той же фокальной плоскости, WCA способен обеспечить количественный анализ цитотоксичности в режиме реального времени без удаления эритроцитов. Кроме того, автоматическая система визуализации обеспечивает ряд преимуществ, таких как, что только клетки-мишени, которые достигли заданных критериев (например., Флуоресцентно меченых клеток и клеточной морфологии) пропускаются и обработанные. Кроме того, это позволяет получать 144 пластин в день. Следовательно, эта возможность визуализации и пропускная позволяет ход высокой сontent и высокой пропускной экспериментов одновременно. Объединив WCA и автоматизированной системы обработки изображений, высокой пропускной анализ количественного цитотоксичность клеток может быть достигнуто в течение более биологической соответствующей среде.
WCA является критическим в пробирке против рака скрининга с резолюцией одного сотового 12-16 идеально используемой после традиционных целевых показов, таких как CDC и ADCC анализов 9-11, и до доклинических испытаний на животных. В настоящее время, первичный целевые скрининговы…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим программу имать Национальный институт рака от NIH для финансирования этой работы [R33 CA174616-01A1].
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Name/Discription |
Cell attachment 96 well plate kits | Adheren | AP9601 | |
Suspension Single cell array 8 well chamber slide | Adheren | SS0801 | |
Adherent Single cell array 8 well chamber slide | Adheren | SS0802 | |
Lymphoma cell line CD20+ | ATCC | CCL-86 | Raji cells |
Lymphoma cell line CD20- | ATCC | CRL-8083 | MC/CAR |
RPMI 1640 with L-glutamine | Life Technologies | 11875-119 | |
Fetal Bovine Serum | Thermo | SH30070.01HI | |
Peni/Strep | Life Technologies | 15070063 | |
Cytosolic dye | Life Technologies | C7025 | Cell Tracker Green |
Rituxan (Biosimilar) | Eureka Therapeutics | ||
Human whole blood | Allcells | WB001 | |
Propidium Iodide | Sigma | P4170-10MG | |
Automatic imaging system | Molecular Devices | Contact Vendor | Cell Reporter |
Cell counting program | Molecular Devices | Contact Vendor | Cell Reporter |