We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.
وضع العلامات خلايا الشبكية العقدة كما الوراء (RGCs) يمكن عزل RGCs somata من الموت المواقع، فقد أصبح معيار الذهب لحساب RGCs في بقاء RGCs والتجارب التجدد. وقد أجريت العديد من الدراسات في الحيوانات الثديية للبحث بقاء RGCs بعد إصابة العصب البصري. ومع ذلك، لم يتم حتى الآن وضع العلامات ذكرت الوراء من RGCs في الزرد الكبار، على الرغم من بعض طرق بديلة يمكن الاعتماد أعداد الخلايا في شبكية العين طبقات الخلايا العقدية (RGCL). بالنظر إلى حجم صغير من الكبار الجمجمة الزرد ومخاطر عالية للوفاة بعد الحفر على الجمجمة، ونحن فتح الجمجمة مع مساعدة من حمض النقش وختم الحفرة مع السندات علاج الخفيفة، والتي يمكن أن تحسن كبير في معدل البقاء على قيد الحياة. بعد امتصاص الأصباغ لمدة 5 أيام، وصفت تقريبا جميع RGCs. كما لا تحتاج هذه الطريقة إلى القطع العصب البصري، بل هو لا يمكن الاستغناء عنه في مجال البحث من بقاء RGCs بعد سحق البصرية العصبية في الزرد الكبار. هنا، ونحن نقدمهذه الخطوة خطوة، وطريقة تقديم نتائج ممثل.
كما الزرد الكبار لديهم قدرة قوية لتجديد محاور عصبية بعد إصابة العصب البصري 1، وهي الطريقة الصحيحة لحساب RGCs كله أمر ضروري لتقييم بقاء RGCs والتجديد 2. استنادا إلى طرق وضع العلامات RGCs إلى الوراء في الثدييات وذهبية 3-5، اقمنا طريقة لتسمية RGCs من السقف في الزرد الكبار. لالزرد الكبار، وتجدر الإشارة إلى شاغلين التقنية الحرجة: جمجمة الزرد الكبار صغيرة جدا 6؛ أنهم يعيشون في بيئة المياه. هنا، ونحن علاج الجمجمة مع منمش مما يقلل المخاطر المرتبطة حفر 5. ثم، فإننا ختم حفرة مع السندات علاج ضوء الذي يحسن البقاء على قيد الحياة الحيوانية بعد الجراحة.
سابقا، تم اعتماد العديد من التقنيات الأخرى لحساب عدد RGCs بطرق غير مباشرة. سعادة تلطيخ في الأقسام الشبكية تسميات جميع أنواع الخلايا في RGCL 7. وضع العلامات الأجسام المضادة في ص كلهetina، مثل جزيرة-1، ويمكن أيضا تسمية الخلايا عديم الاستطالات 8. على الرغم من التسمية إلى الوراء من الجدعة العصب البصري يمكن تسمية كل RGCs في شبكية العين، فإنه لا يمكن اعتمادها في نموذج سحق لأنه يسبب الإصابة إضافية إلى العصب البصري. الاستفادة من التسمية إلى الوراء من السقف، ولقد بحثت بقاء RGCs والتجديد في سحق البصرية العصبية. تظهر النتائج أن ما يقرب من جميع RGCs نجا وأكثر من 90٪ من RGCs مجدد إلى السقف في الأسبوع الأول في النموذج سحق 9.
من أجل تسمية كل RGCs بنجاح، وقد تم اختيار معجون الجاذبة بعد المقارنة مع العديد من الأصباغ التجارية الأخرى 10. أولا، ومصمم خصيصا لوضع العلامات في الجسم الحي الأنسجة. ثانيا، بل هو صبغ محبة للدهون التي لا يمكن منتشر في الماء. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لهذا مضان تستمر لفترة طويلة مما يجعله مرشح ممتاز للبقاء RGCs البحوث.
وضع العلامات إلى الوراء من RGCs المهم للبحث بقاء RGCs في الحيوانات الثديية، ولكن لم يتم استخدامه في الزرد. الطرق البديلة، وسعادة تلطيخ 7 و 8 تلوين الأجسام المضادة، ليست معايير الذهب لحساب عدد RGCs، وخطوط المعدلة وراثيا مع جميع RGCs وصفت لم يتم بناؤها 12، 13. في …
The authors have nothing to disclose.
This is supported by 973 MOST grant (Grant No. 2011CB504402, 2012CB947602), National Natural Science Foundation of China (Grant No. 91132724, U1332136) and the ‘Hundred Talents Project’ of Chinese Academy of Science. The protocol was approved by the Committee on the Ethics of Animal Experiments of the USTC (Permit Number: USTCACUC1103013).
MS222 | Sigma Aldrich | E10521 | USA |
DiI | Invitrogen | N22880 | USA |
lightcuring bond | Heraeus Kulzer | Durafill bond | Germany |
Gluma Etch | Heraeus Kulzer | Gluma Etch 35 Gel | Germany |
Blue LED | Shenruo Medical Equipment Co. | Power Blue Light Curing Unit | China |