肺炎球菌によるマウス鼻咽頭のコロニー形成および後の付着またはリクルートされた細胞の抽出について説明する。この技術は、ナアレスを通して鼻咽頭および流体の収集を洗い流し、その場所でのmRNA発現の差動細胞定量および分析を含む様々な読み出しに適応可能である。
肺炎球菌による鼻咽頭コロニー形成は、肺または血流1に侵入する前提条件である。この生物は、鼻咽頭の粘膜表面を植民地化することができ、宿主の他の組織に侵入するために宿主防御を克服し、増殖し、最終的に克服することができる。通常下気道に感染を起こすと肺炎が生じる。あるいは、細菌は、高い死亡率2に関連する細菌血症を引き起こす血流に広がり得るか、またはそれ以外の場合は肺炎球菌性髄膜炎の発症に直接導く。鼻咽頭コロニー形成の運動学および免疫応答を理解することは、S.肺炎感染モデルの重要な側面である。
我々の鼻腔内コロニー形成のマウスモデルは、ヒトモデル3 から適応され、鼻咽頭4-7における宿主病原体応答の研究において複数の研究グループによって使用されている。モデルの最初の部分では 、S.肺炎 の臨床的分離株を使用して、ヒト成人のキャリッジイベントに似た自己制限細菌コロニー形成を確立する。本明細書で詳述される手順は、細菌接種の調製を含み、続いて鼻腔内投与経路を介して接種を送達することによってコロニー形成事象を確立する。居住マクロファージは、定常状態の間に鼻咽頭の主要な細胞型である。典型的には、未感染マウス8に存在するリンパ球はほとんど存在しないが、粘膜コロニー形成は、免疫応答とその後の宿主免疫細胞の動員をもたらす低位から高等級の炎症(細菌種および株の病原性に応じて)をもたらす。これらの細胞は、ナレスを通して気管内容物の洗浄によって単離され、感染の動態をよりよく理解するためにコロニー形成細菌の密度と相関することができる。
本研究では、 肺炎球菌 の臨床単離株を用いたマウスの鼻腔内浸着の詳細な方法と、その後の細菌に応答して鼻咽頭に採用された免疫細胞の単離および特徴付けについて明記した。我々は、細菌接種物を栄養豊富な培地で培養し、マウスの植民地化イベントを確立するために使用する方法を実証した。次に、鼻咽頭に採用された免疫細胞型の応答が、口蓋暴露、切開および鼻洗浄に続?…
The authors have nothing to disclose.
著者らは、ペンシルベニア大学のジェフリー・ワイザー博士が 肺炎球菌の臨床株の贈り物に感謝したいと思います。この研究は、カナダ保健研究所によって資金提供されました。CVは、M.G.デグルートフェローシップとカナダ胸部協会からのフェローシップによって資金提供されました。この研究は、オンタリオ肺協会とカナダ保健研究所(CIHR)によって資金提供されました。ボウディッシュ研究所での研究は、マイケル・G・デグルート感染症研究センターとマクマスター免疫学研究センターによって部分的にサポートされています。
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | |
Anti-Mouse Ly6C FITC | BD Pharmingen | 553104 | |
Anti-Mouse Ly6G PE | BD Pharmingen | ||
Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450 | eBioscience | 48-0453-82 | |
Anti-Mouse F4/80 Antigen APC | eBioscience | 17-4801-82 | |
Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5 | eBioscience | 45-0114-82 | |
Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 | eBioscience | 25-0112-82 | |
Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700 | eBioscience | 56-0032-82 | |
Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC | eBioscience | 93-0041-42 | |
Intramedic Polyethylene Tubing – PE20 | Becton Dickinson | 427406 | |
BD 1ml Syringe | Becton Dickinson | 309659 | |
BD 26G3/8 Intradermal Bevel | Becton Dickinson | 305110 | |
Buffer RLT Lysis Buffer | Qiagen | 79216 | |
Difco Tryptic Soy Agar | Becton Dickinson | 236950 | |
Defibrinated Sheep Blood | PML Microbiologicals | A0404 | |
RNAqueous-Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
M-MuLV Reverse Transcriptase | New England Biolabs | M0253L | |
GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 |