La colonisation du nasopharynx murin avec Streptococcus pneumoniae et l’extraction ultérieure des cellules adhérentes ou recrutées sont décrites. Cette technique consiste à rincer le nasopharynx et la collecte du liquide à travers les narines et est adaptable à diverses lectures, y compris la quantification cellulaire différentielle et l’analyse de l’expression de l’ARNm in situ.
La colonisation nasopharyngée par Streptococcus pneumoniae est une condition préalable à l’invasion des poumons ou de la circulation sanguine1. Cet organisme est capable de coloniser la surface muqueuse du nasopharynx, où il peut résider, se multiplier et éventuellement surmonter les défenses de l’hôte pour envahir d’autres tissus de l’hôte. L’établissement d’une infection dans les voies respiratoires normalement inférieures entraîne une pneumonie. Alternativement, la bactérie peut se disséminer dans la circulation sanguine provoquant une bactériémie, qui est associée à des taux de mortalité élevés2, ou bien conduire directement au développement d’une méningite à pneumocoque. Comprendre la cinétique de la colonisation nasopharyngé et les réponses immunitaires à celle-ci est un aspect important des modèles d’infection à S. pneumoniae.
Notre modèle murin de colonisation intranasale est adapté des modèles humains3 et a été utilisé par plusieurs groupes de recherche dans l’étude des réponses hôte-pathogène dans le nasopharynx4-7. Dans la première partie du modèle, nous utilisons un isolat clinique de S. pneumoniae pour établir une colonisation bactérienne auto-limitante qui est similaire aux événements de portage chez les adultes humains. La procédure décrite ci-dessus implique la préparation d’un inoculum bactérien, suivie de l’établissement d’un événement de colonisation par la livraison de l’inoculum par l’intermédiaire d’une voie intranasale d’administration. Les macrophages résidents sont le type de cellule prédominant dans le nasopharynx pendant l’état stable. Typiquement, il y a peu de lymphocytes présents chez les souris non infectées8, mais la colonisation muqueuse conduira à une inflammation de bas à haut grade (en fonction de la virulence de l’espèce bactérienne et de la souche) qui entraînera une réponse immunitaire et le recrutement ultérieur des cellules immunitaires de l’hôte. Ces cellules peuvent être isolées par un lavage du contenu trachéal à travers les narines, et corrélées à la densité des bactéries de colonisation pour mieux comprendre la cinétique de l’infection.
Dans cette étude, nous avons présenté des méthodes détaillées pour la colonisation intranasale de souris utilisant une souche d’isolat clinique de Streptococcus pneumoniae et l’isolement et la caractérisation ultérieurs des cellules immunitaires recrutées au nasopharynx en réponse aux bactéries. Nous avons démontré comment un inoculum bactérien peut être cultivé dans des milieux riches en nutriments et utilisé pour établir un événement de colonisation chez la souris, qui est initialement …
The authors have nothing to disclose.
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Jeffery Weiser de l’Université de Pennsylvanie pour son don des souches cliniques de Streptococcus pneumoniae. Ces travaux ont été financés par les Instituts de recherche en santé du Canada. CV a été financé par une bourse M. G. DeGroote et une bourse de la Société canadienne de thoracologie. Ces travaux ont été financés par l’Association pulmonaire de l’Ontario et les Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC). Les travaux du laboratoire Bowdish sont appuyés en partie par le Michael G. DeGroote Centre for Infectious Disease Research et le McMaster Immunology Research Centre.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | |
Anti-Mouse Ly6C FITC | BD Pharmingen | 553104 | |
Anti-Mouse Ly6G PE | BD Pharmingen | ||
Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450 | eBioscience | 48-0453-82 | |
Anti-Mouse F4/80 Antigen APC | eBioscience | 17-4801-82 | |
Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5 | eBioscience | 45-0114-82 | |
Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 | eBioscience | 25-0112-82 | |
Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700 | eBioscience | 56-0032-82 | |
Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC | eBioscience | 93-0041-42 | |
Intramedic Polyethylene Tubing – PE20 | Becton Dickinson | 427406 | |
BD 1ml Syringe | Becton Dickinson | 309659 | |
BD 26G3/8 Intradermal Bevel | Becton Dickinson | 305110 | |
Buffer RLT Lysis Buffer | Qiagen | 79216 | |
Difco Tryptic Soy Agar | Becton Dickinson | 236950 | |
Defibrinated Sheep Blood | PML Microbiologicals | A0404 | |
RNAqueous-Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
M-MuLV Reverse Transcriptase | New England Biolabs | M0253L | |
GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 |