يوصف بروتوكول معين وسريعة للتحقيق في وقت واحد الحق وظيفة القلب، والتهاب الرئة، والاستجابة المناعية ليكون أداة تعليمية. فيديو والشخصيات تصف علم وظائف الأعضاء والتقنيات تسليخ مجهري في نهج فرق التي نظمت قابل للتكيف لاستخدامها في الدراسات الصغيرة وذات الحجم الكبير.
وظيفة القلب الصحيح هو ضخ الدم عبر الرئتين، وبالتالي ربط الحق علم وظائف الأعضاء علم وظائف الأعضاء والقلب الوعائية الرئوية. هو التهاب معدل المشتركة للقلب وظائف الرئة، عن طريق وضع تسلل الخلوية، وإنتاج السيتوكينات وعوامل النمو، والشروع في عمليات إعادة عرض 1.
بالمقارنة مع البطين الأيسر، البطين الأيمن هو مضخة ذات ضغط منخفض تعمل في منطقة ضيقة نسبيا من تغيرات الضغط. وترتبط زيادة الضغوط الشريان الرئوي مع زيادة الضغط في الأوعية الدموية في الرئة السرير وارتفاع ضغط الدم الرئوي 2. وكثيرا ما يرتبط ارتفاع ضغط الدم الرئوي مع أمراض الرئة التهابات، وعلى سبيل المثال مرض الانسداد الرئوي المزمن، أو أمراض المناعة الذاتية 3. لأن ارتفاع ضغط الدم الرئوي يمنح التكهن سيئة لنوعية الحياة ومتوسط العمر المتوقع، يتم توجيه الكثير من البحث من أجل فهم الآليات التي من طراز ميغHT تكون أهدافا لمدة 4 تدخل الصيدلانية. التحدي الرئيسي لتطوير أدوات الإدارة الفعالة لارتفاع ضغط الدم الرئوي لا تزال تعقد في وقت واحد فهم التغيرات الجزيئية والخلوية في قلب الحق والرئتين والجهاز المناعي.
هنا، نقدم سير العمل الإجرائية لقياس سرعة ودقة من اختلاف الضغط في قلب حق الفئران والحصاد في وقت واحد من عينات من الرئتين والقلب والأنسجة المناعية. وتستند هذه الطريقة على قسطرة المباشر من البطين الأيمن عبر الوريد الوداجي في الصدر بالقرب الفئران، للمرة الأولى في أواخر 1990s كإجراء بديل من الضغوط في الشريان الرئوي 5-13. ونظمت فريق نهج يسهل قسطرة القلب سريعة جدا الحق التقنية. هذا يجعل من الممكن إجراء القياسات في الفئران التي تتنفس هواء الغرفة تلقائيا. تنظيم تدفق العمل في مجالات العمل المتميزةيقلل الوقت وتأخير يفتح إمكانية لإجراء التجارب في وقت واحد وعلم وظائف الأعضاء حصاد الأنسجة المناعية والقلب والرئة.
يمكن تكييفها سير العمل الإجرائية المذكورة هنا لطائفة واسعة من الإعدادات المختبرات والتصاميم الدراسة، من التجارب الصغيرة المستهدفة، والكبيرة المقايسات فحص المخدرات. اكتساب علم وظائف الأعضاء في وقت واحد من البيانات القلب التي يمكن توسيعها لتشمل تخطيط صدى القلب 5،14-17 وحصاد الأنسجة القلب والرئة والجهاز المناعي يقلل من عدد الحيوانات اللازمة للحصول على البيانات التي تحرك أساس المعرفة العلمية إلى الأمام. سير العمل الإجرائية المقدمة هنا كما يقدم قاعدة مثالية لاكتساب المعرفة من الشبكات التي تربط المناعة والرئة وظيفة القلب. يمكن تكييفها نفس المبادئ الموضحة هنا لدراسة الأجهزة الأخرى أو إضافية حسب الحاجة.
تدفق التجريبية المذكورة هنا يسمح لقياس السريع والمتزامن لالبطين الأيمن الضغط الانقباضي وحصاد عينات للتحليل الردود في القلب والرئتين والجهاز المناعي لدى الفئران. الإجراء يجمع بين قياسات فسيولوجية القلب، والصغرى تشريح الأنسجة الحصاد اللاحقة للدراسات الخلية الحية،…
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة 1R21HL092370-01 (GG)، 1R01 HL095764-01 (GG)؛ R01HL082694 (JW)؛ جمعية القلب الأمريكية، المؤسسين التابعة لها (0855943D، GG)؛ ستوني القفر – هربرت الصندوق، نيويورك (SHP).
Name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Reagents | |||
2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 152463 | |
2,2,2-Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | |
disinfectant soap (Coverage Spray TB plus Steris) | Fisher Scientific | 1629-08 | |
Ethyl Alcohol, 200 Proof, Absolute, Anhydrous ACS/USP Grade | PHARMCO-AAPER | 111000200 | Dilute to 70 % with distilled water |
Formaldehyde solution | Sigma-Aldrich | F1635-500ML | Dilute to a 7-10 % formaldehyde concentration at a PBS concentration of 1x using PBS stock solution and water |
Hanks solution, no calcium, magnesium | Fisher Scientific | 21-022-CV | |
O.C.T | Tissue-Tek | 4583 | |
Penicillin (10,000 U/ml) / Streptomycin (10,000 mg/ml) solution | Thermo Scientific | SV30010 | |
Phosphate buffered saline (PBS), no calcium, no magnesium, 1x and 10x solutions | Fisher Scientific | ||
Sodium pentobarbital 26% | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-0471-01 | |
Labware | |||
Plates 12, 24, 96 well | Falcon | ||
Transfer Pipet | Fisher Scientific | 13-711-9BM | |
Tube, EDTA coated | Sarstedt | 2013-08 | |
Tubes 0.65 ml and 1.7 ml micro-centrifuge | VWR | ||
Tubes 12 x 75 mm polypropylene | Fisher Scientific | 14-956-1D | |
Tubes, various sizes, polypropylene | Fisher Scientific | ||
Instruments | |||
Forceps, Dumon #5 Fine | Fine Science Tools | 11254-20 | |
Forceps, extra fine graefe -0.5 mm tips curved | Fine Science Tools | 11152-10 | |
Forceps, extra fine graefe -0.5 mm tips straight | Fine Science Tools | 11150-10 | |
Cannula 18 ga, 19 ga | BD | Precision Glide Needles | Cut to optimal length, blunted and outside rasped to create a rough outside surface. |
Scissors, Dissector scissors-slim blades 9 cm | Fine Science Tools | 14081-09 | |
Suture for BAL, braided silk suture, 4-0 | Fine Science Tools | SP116 | |
Suture for right heart catheterization, braided silk suture, 6-0 | Teleflex medical | 18020-60 | |
Syringe, 1 ml | BD | 309659 | |
Equipment | |||
Amplifier, PowerLab 4/30 | ADInstrument | Model ML866 | |
Catheter, pressure F1.4 | Millar Instruments, Inc | 840-6719 | |
Dissecting Microscope | Variscope | ||
Forceps, Vannas spring scissors-2 mm blades | Fine Science Tools | 15000-00 | |
Halogen Illuminated Desk Magnifier | Fisher Scientific | 11-990-56 | |
Laptop computer | Asus | Model number A52F i5 processor; 15 inch | |
Light Source | Amscope | HL-250-A | |
Pressure Control Unit | Millar Instruments, Inc | PCU-2000 | |
Software, Labchart-Pro V.7 | AD Instruments |