هذا الفيديو يشرح بروتوكول تطبيق صبغة الفلورسنت استر succinimidyl carboxyfluorescein (CFSE) لتحديد وفصل السكان الفرعية المختلفة من الخلايا في ورم أرومي دبقي الإنسان على أساس تواتر انقسام الخلايا.
عدم التجانس الورم يمثل سمة أساسية دعم متانة الورم ويشكل عائقا أساسيا في وضع استراتيجيات علاجية 1. للتغلب على مسألة عدم التجانس الورم، فمن الضروري لتطوير المقايسات وأدوات تمكينية المظهري، (EPI) تحديد الوراثية والوظيفية وتوصيف المجموعات السكانية الفرعية التي تدفع الأمراض السرطانية مرض محدد، وتمثل الأهداف ذات الصلة سريريا. والآن راسخة أن الأورام تظهر متميزة الفرعية كسور الخلايا مع ترددات مختلفة من انقسام الخلايا، والذي يرتبط بشكل إيجابي على معايير وظيفية يجري الدراجات بطيئة مع القدرة تشكيل الورم في سرطان عدة بما في ذلك الدماغ والجلد والثدي و البنكرياس وكذلك سرطان الدم 2-8. تم استخدام صبغة الفلورسنت carboxyfluorescein succinimidyl استر (CFSE) لتتبع وتيرة انقسام الخلايا في المختبر والمجراة في الدم المنقولة رumors والأورام الصلبة مثل ورم أرومي دبقي 2،7،8. يتم تحويل الخلايا نفيذ غير الفلورسنت المؤيدة لتعاطي المخدرات من قبل CFSE الاسترات داخل الخلايا إلى مجمع الفلورسنت، والتي يتم الاحتفاظ داخل الخلايا بواسطة ملزمة تساهميا إلى البروتينات من خلال رد فعل شاردة في succinimidyl مع مجموعات أمين الخلايا لتشكيل السندات مستقرة أميد 9. موزعة بالتساوي بين صبغة الفلورسنت الخلايا الوليدة على الانقسامات، مما أدى إلى بمقدار النصف من شدة التألق مع كل انقسام الخلية. وهذا يتيح تتبع دورة الخلية تردد تصل إلى 8-10 جولات من تقسيم 10. وقد استخدم CFSE القدرة على الاحتفاظ بخلايا ورم في المخ لتحديد وعزل جزء من السكان الدراجات بطيئة (أعلى 5٪ صبغ الاحتفاظ الخلايا) أظهرت لتخصيبه في نشاط الخلايا الجذعية السرطانية 2.
يصف هذا البروتوكول أسلوب تلطيخ الخلايا مع CFSE وعزل السكان الفردية ضمن ثقافة الإنسان الدبقأرومي (GBM) الخلايا المشتقة امتلاك معدلات مختلفة باستخدام تقسيم التدفق الخلوي 2. وقد خدم هذه التقنية لتحديد وعزل ورم دماغي بطيء الدراجات السكان من الخلايا بحكم قدرتها على الإبقاء على وضع العلامات CFSE.
وقد أظهرت عددا متزايدا من الدراسات على أهمية وجود حجرة الفرعية بطيئة تقسيم الخلايا في سرطان التي تسهم في تشكيل الورم والعلاج المقاومة 2-8. ولذلك فمن الأهمية بمكان لوصف وتوحيد الطرق التجريبية تمكن دراسة هذه حيوانية معينة من الخلايا أو أكثر لمقارنة مجموعات سكاني?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل مركز فلوريدا لأبحاث استئصال ورم من الدماغ، وA. بريستون ويلز الابن مركز للعلاج استئصال ورم من الدماغ والمعاهد الوطنية للصحة (1R21CA141020-01).
Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number |
NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 |
Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 |
Penicillin/Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG |
CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Fluorescent Cell Division Tracking Dye | Molecular Probes, Invitrogen | C34554 |