Do-It-Yourself de dispositivos para la recuperación de las muestras criopreservadas de caída accidental en los tanques de almacenamiento criogénicos
Summary
Aquí se presenta un bajo coste, duradero dispositivo de cryotolerant para la recuperación de la muestra de los tanques de Dewar lleno de nitrógeno líquido. La facilidad de construcción y el diseño modular del dispositivo hace que el proceso de recuperación de muestras de los tanques criogénicos seguro y fácil.
Abstract
El nitrógeno líquido es incoloro, inodoro, muy frío (-196 ° C) de líquido mantiene bajo presión. Se utiliza comúnmente como un fluido criogénico para el almacenamiento a largo plazo de los materiales biológicos tales como sangre, células y tejidos 1,2. La naturaleza criogénica de nitrógeno líquido, mientras ideal para la preservación de la muestra, puede causar una rápida congelación de los tejidos vivos en contacto – conocido como "quemadura criogénica '2, que puede conducir a la congelación severa en personas estrechamente implicados en el almacenamiento y recuperación de muestras de Dewars. Además, como el nitrógeno líquido se evapora, se reduce la concentración de oxígeno en el aire y pueden causar asfixia, especialmente en espacios confinados 2.
En los laboratorios, las muestras biológicas a menudo se almacenan en crioviales o criocajas apilados en bastidores de acero inoxidable dentro de los tanques de Dewar 1. Estos bastidores de almacenamiento se proporcionan con un eje largo para evitar que las cajas se deslice fuera de los bastidores y en la parte inferior deDewars durante el manejo de rutina. Con demasiada frecuencia, sin embargo, las cajas o frascos con muestras preciosas salirse y se hunden hasta el fondo del tanque de nitrógeno líquido llena. En tales casos, las muestras pueden ser tediosamente recuperado después de transferir el nitrógeno líquido en un recipiente de repuesto o desecharlo. Las cajas y los viales a continuación, puede ser relativamente segura recuperado de vaciado Dewar. Sin embargo, la naturaleza criogénica de nitrógeno líquido y su tasa de expansión hace peligrosos hundida recuperación de la muestra. Se recomienda con frecuencia por las oficinas de seguridad que la recuperación de la muestra no se llevará a cabo por una sola persona. Otra alternativa es el uso de tarjetas de adquisición de frescos disponibles en el mercado o tenazas para sacar los 3 viales. Sin embargo, la visibilidad limitada en la oscuridad Dewars llenos de líquido representa una importante limitación en su uso.
En este artículo se describe la construcción de un dispositivo de recuperación de Cryotolerant bricolaje, lo que hace que la recuperación de la muestra de Dewar que contiene líquidos criogénicos, tanto de caja fuerteª fáciles.
Protocol
Discussion
Uno de los métodos más comunes de recuperar criocajas y crioviales desde el fondo del tanque Dewar es decantar nitrógeno líquido en un recipiente de repuesto y extraer las muestras restantes en el matraz o flotando en el nitrógeno líquido se decantó. Esta es, sin embargo, una práctica insegura que puede causar quemaduras criogénicas o asfixia debido a la exposición prolongada a vapores de nitrógeno líquido 2. Otra forma común de recuperación de los crioviales caídos implica el uso de pinzas cri…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DIY criogénico dispositivo de recuperación ha sido probado en el curso de los proyectos "prenilación modelado de proteínas bacterianas en las células eucariotas uso de la bioinformática y los enfoques moleculares", patrocinado por Mary Louise Andrews Premio para el programa de Investigación del Cáncer, la Academia de Ciencias de Virginia, "significado fisiológico de la edición del ARN en el plasma Las células dendríticas "patrocinado por la Jeffress Thomas F. Miller y Kate Jeffress Memorial Trust y el Contrato 16.740.11.0364 Estado (Ministerio de Educación y Ciencia, Rusia). Nos gustaría dar las gracias a Bet Eom para obtener ayuda con el experimento de la integridad del RNA.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
