增长结核分枝杆菌生物膜
Summary
结核分枝杆菌形成药物宽容生物膜时，在一定条件下培养。在这里，我们描述研究方法，培养结核病生物膜和确定药物宽容的，持久的频率。这些协议将在研究药物的耐受性机制的进一步研究有用肺结核 。
Abstract
结核分枝杆菌 ，人类结核病的病原体，具有非凡的能力，对环境压力，包括抗生素生存。虽然M 的抗逆性肺结核是肺结核1长到6个月化疗可能的贡献者之一，这种病原体的特征表型相关的分子机制仍不清楚。许多微生物物种进化生存在紧张的环境中具有高度组织性，附着表面，称为生物膜2-4矩阵封装结构的自组装。在社区的增长似乎是首选的生存策略的微生物，并通过遗传成分，调节表面附着，细胞间的通信，以及合成胞外聚合物（EPS）的5,6来实现。用EPS环境胁迫可能是促进，也许在physiolo的gical适应个别杆菌异质微环境内的复杂结构生物膜7。
在最近的一系列文件中，我们建立的研究肺结核和耻垢分枝杆菌有强大的增长倾向有组织的多细胞结构，称为生物膜，它可以容忍50倍以上的抗结核药物异烟肼和利福平8-10最小抑菌浓度研究然而， 肺结核，有趣的是需要特定条件下形成成熟的生物膜，在顶尤其是9:1的比例：媒体以及有限的空气与大气的交换9。专门的环境条件的要求可能被链接到的事实， 研究结核病是预留的人类病原体，从而适应组织环境。本出版物中，我们证明培养的研究方法肺结核生物膜在一个瓶子和一个12孔板格式，这是方便的细菌以及遗传研究。我们已经描述为分枝杆菌弱毒疫苗株的协议7000肺结核，MC 2，删除在两个位点，panCD和RD1，关键是在体内生长的病原体9。这株可以安全地使用在BSL-2遏制结核病的病原体，从而避免了昂贵的BSL-3设施的要求理解基本生物学。与媒体适当的修改，该方法可以延长，生物膜增长的其他分枝杆菌培养物种。
总体而言，一个统一的协议将有助于培养分枝杆菌生物膜感兴趣的研究者在研究结核分枝杆菌的基本弹性特点。此外，日益增长的分枝杆菌生物膜清晰，简明的方法，也将有助于临床和制药INVestigators测试一种潜在的药物的疗效。
Protocol
Discussion
肺结核（TB）， 结核分枝杆菌感染引起的，仍然是一个全球公共卫生的重大威胁。估计无症状感染的病原体之一的人口占世界人口近三分之一，约900万新病例出现在诊所，每年有活动性肺结核约1.7万人死于感染每年11症状。巨大的疾病负担主要是由于缺乏疫苗和一个高度复杂的化疗，涉及多重的方案，超过六至九个月的管理作出贡献。长期化疗在很大程度上归因于表型的小亚群的病…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作进行了卫生研究所和美国肺脏协会的财政支持。
Materials
| Equipment and supplies | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
| Incubator | VWR | Model # 1923/25 |
| Polystyrene culture bottles | Fisher Scientific | 03-374-300 |
| 12-well tissue culture plate | VWR | 62406-165 |
| 50-mL conical tubes | VWR | 89039-660 |
| Rocker | Thermo Scientific | 57019-662 |
| Chromatographic refrigerator | VWR | 55702-520 |
| petri dish | VWR | 25384-342 |
| REAGENT | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
| KH2PO4 (monobasic) | EMD | PX1565-1 |
| MgSO4 | Fisher | M65-500 |
| L-asparagine | Sigma | A4284-100G |
| citric acid | Sigma | C1857-100G |
| ferric ammonium citrate | Sigma | F5879-100G |
| glycerol | EMD | GX0185-5 |
| NaOH | Sigma | S8045-500G |
| ZnSO4 | Sigma | Z4750-500G |
| D-pantothenic acid | Sigma | P2250-25G |
| Difco Middlebrook 7H9 Broth | Becton Dickinson | 271310 |
| Middlebrook OADC Enrichment | BBL | 212351 |
| Tween-80 | Fisher | T164-500 |
| 250mL storage bottle | Corning | 430281 |
| 12 well plates | Falcon (BD) | 353043 |
| rifampicin | Sigma | R3501-1G |
| methanol | J.T. Baker | 9070-05 |
| 10mlLsyringe | Becton Dickinson | 301604 |
| 1-200μL pipet tips | VWR | 89079-458 |
| parafilm M | VWR | PM-996 |
| 15mL centrifuge tube | Greiner Bio-One | 188-285 |
| Difco Mycobacteria 7H11 Agar | Becton Dickinson | 283810 |
| NaCl | Fisher | BP358-1 |
| KCl | Sigma | P9333-500G |
| Na2HPO4 (dibasic) | Sigma | S0876-500G |
References
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