Summary

胎児マウスから海馬ニューロンの単離および培養

Published: July 26, 2012
doi:

Summary

私達は非常にフィーダーグリア細胞層を使用せずに出生マウスの脳から海馬神経細胞の精製培養のためのプロトコルを提供しています。

Abstract

ラットおよびマウスの海馬ニューロンの初代培養は広く神経生物学で細胞メカニズムを明らかにするために使用されています。個々のニューロンを分離し、成長させることにより、研究者は細胞輸送、細胞の構造と生化学的な様々な技術を使用して、個々のタンパク質の局在化に関連するプロパティを分析することができます。このような実験の結果から、記憶や学習の神経基盤を扱う理論をテストするために重要である。しかし、実験のこれらの形態から明白な結果は、他の脳細胞の種類によって最小汚染と神経細胞の培養物を成長させる能力を前提としています。このプロトコルでは、我々は、汚染の細胞タイプ(すなわち、アストロサイト)を最小限に抑えながら、健全な神経細胞の成長を最適化するために、ニューロンの成長と胚の海馬組織を慎重に解剖用に設計された特定のメディアを使用しています。マウス胎児海馬組織は、ジのサンプルの大きさのために類似したげっ歯類の組織より単離することが難しくなる可能性がありますssection。我々は、胚性19日目(E19)仔マウスから海馬の詳細な解剖の技術を示しています。一度海馬組織が分離されている個々のセルに最小ダメージを提供しながら、神経細胞の穏やかな解離は、トリプシンと結合組織から独立した細胞に設計された機械的破壊の希釈濃度で達成されます。混乱に使用するピペットを準備する方法の詳細な説明が含まれています。最適なメッキ密度が成功した細胞培養を最大化するための免疫蛍光のプロトコルのために用意されています。プロトコルは、マウス海馬組織から神経細胞の培養のための、高速(約2時間)と効率的な手法を提供しています。

Protocol

1。収穫前のセットアップニューロンの収穫のために出生前の子犬を生成するために、前ニューロンの分離日〜19日成体マウスの間で繁殖をスケジュールします。 (C57BL / 6マウスの年齢2から8月は、このプロトコルを開発する目的のために交配に使用された)。成功した交配、妊娠中の女性、動悸や視覚的な確認に膣栓を検出することによって確認することができます。 ?…

Discussion

海馬の培養は20年以上分子生物学で使用されている。原理的には、神経細胞培養物は、脳のどの部分から作ることができますが、海馬の培養物は、海馬7の神経細胞集団の比較的単純なアーキテクチャにより、最も人気があることが実証されています。海馬培養は、通常、後期胚組織から作られています。この組織は解離しやすくなり、成熟した脳組織1よりも少ないグリア細?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

私たちは、原稿を準備する際に彼の助けのために博士マイケルウーテンに感謝します。この作品は、NIH 2RO1NS033661(MWW)によってサポートされていました。

Materials

Name of Reagent Vendor Catalog Number
Rat Tail Collagen 1 BD Biosciences 354236
Poly-D-lysine Solution Chemicon A-003-E
Hanks Balanced Salt Solution Invitrogen 14175-095
Trypsin Solution (1X) 0.25%, liquid Invitrogen 15050-065
NeuroBasal Medium (1X) liquid Invitrogen 21103-049
B27 Supplement (50X) liquid Invitrogen 17504-044
L-Glutamine 200 mM (100X) liquid Invitrogen 25030-149
Penicillin (10,000 units/ml) / Streptomycin (10,000 μg/ml) Invitrogen 15140-148
HI-Donor Horse Serum Atlanta Biologicals S12150H

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Cite This Article
Seibenhener, M. L., Wooten, M. W. Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice. J. Vis. Exp. (65), e3634, doi:10.3791/3634 (2012).

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