Las principales técnicas que se utilizarán en la evaluación de<em> Candida</emVaginitis> en un modelo animal experimental se describen. Los métodos permitirá una rápida recolección de muestras vaginales y los linfocitos de los ganglios de drenaje linfático lumbar. Estas técnicas pueden dar lugar a modelos de ratón de otras enfermedades en el tracto genital inferior femenino.
Candidiasis vulvovaginal (CVV), causada por especies de Candida, es una infección micótica de la parte baja del tracto genital femenino que afecta a aproximadamente el 75% de las mujeres sanas durante sus años reproductivos 18,32-34. Los factores predisponentes son el uso de antibióticos, diabetes no controlada y la alteración en los niveles hormonales reproductivos debido al embarazo, anticonceptivos orales o terapia de reemplazo hormonal 33,34. VVC recurrente (RVVC), definida como tres o más episodios por año, afecta a un independiente de 5 a 8% de las mujeres sin factores predisponentes 33.
Un modelo experimental de ratón de la CVV se ha establecido y utilizado para estudiar la patogenia y la respuesta del huésped a la mucosa Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Este modelo también se ha empleado para evaluar el potencial terapias antifúngicas in vivo 13,24. El modelo requiere que los animales se mantienen en un estado de pseudoestrus para optarIMAL colonización por Candida / infección 6,14,23. Bajo tales condiciones, los animales inoculados se han detectable carga fúngica vaginal durante semanas o meses. Estudios anteriores muestran un paralelo muy alta entre el modelo animal y la infección humana con respecto a las propiedades inmunológicas y fisiológicas 3,16,21. Las diferencias, sin embargo, son la falta de Candida en la flora vaginal normal y un pH neutro vaginal en los ratones.
Este sentido, demuestran una serie de métodos clave en el modelo de ratón que incluyen vaginitis inoculación vaginal, rápida recolección de muestras vaginales, evaluación de la carga de hongos vaginales, y los preparativos para la extracción de tejido celular / aislamiento. Esto es seguido por resultados representativos para los componentes del flujo vaginal lavado, la carga de hongos, y el drenaje de los rendimientos de los ganglios linfáticos de leucocitos. Con el uso de anestésicos, las muestras de lavado se pueden recoger en múltiples puntos de tiempo en los mismos ratones para la evaluación longitudinal de lainfección / colonización. Además, este modelo no requiere de agentes inmunosupresores para iniciar la infección, lo que los estudios inmunológicos en condiciones de host definidos. Finalmente, el modelo y técnica de cada uno introducido aquí podría dar lugar al uso de las metodologías para examinar otras enfermedades infecciosas del tracto genital femenino (bacterianas, parasitarias, virales) y las respectivas defensas locales o sistémicas.
Un modelo experimental de ratón de la vaginitis por Candida se ha establecido y utilizado históricamente para las últimas décadas para estudiar la respuesta del huésped a la mucosa Candida, así como para las pruebas de terapias antifúngicas 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Los protocolos que aquí se presenta incorpora eficientes y los métodos menos mano de obra, y parece ser uno de los sistemas modelo más optimizada de Candida vaginitis descrito hasta la fecha. Estas técn…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por el R01 AI32556 (NIAID, Instituto Nacional de Salud). Este trabajo también fue apoyado en parte por Louisiana vacuna centro y sur de Luisiana Instituto de Investigación de Enfermedades Infecciosas patrocinada por la Junta de Regentes de Louisiana.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |