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Immunology and Infection

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

Published: December 08, 2011
doi:
10.3791/3382
,
1Louisiana State University Health Sciences Center

Summary

평가에 사용되는 주요 기술<em> 칸디다</em실험 동물 모델에서> 질염이 설명되어 있습니다. 방법은 허리 림프절을 배수의 질 표본 및 lymphocytes의 급속한 컬렉션을하실 수 있습니다. 이 기술은 여성의 낮은 성기 요로에있는 다른 질병의 마우스 모델에 상승을 줄 수 있습니다.

Abstract

칸디다 종에 의한 Vulvovaginal 칸디다 증 (VVC)은, 그들의 생식 년 18,32-34 동안 달리 건강한 여성의 약 75 %에 영향을 미치는 낮은 여성의 성기 요로의 곰팡이 감염입니다. Predisposing 요인 항생제 사용, 통제 당뇨병 방해 생식 호르몬 수준에 임신으로 인해, 경구 피임약이나 호르몬 대체 요법 33,34을 포함합니다. 연간 세 개 이상의 에피소드로 정의된 재발성 VVC (RVVC)는없고 predisposing 요인 33 여성의 8 %를 별도의 다섯 영향을 미칩니다.

VVC의 실험 마우스 모델은 설립 pathogenesis과 칸디다 3,4,11,16,17,19,21,25,37에 점막 호스트 응답을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 모델은 또한 생체내 13,24 잠재적인 antifungal 치료를 테스트하기 위해 고용되었습니다. 모델 동물에 대한 선택 pseudoestrus의 상태로 유지합니다imal 칸디다 식민 / 감염 6,14,23. 이러한 조건에서, 주사 동물 개월 주 동안 질 곰팡이 부담을 감지합니다. 과거 연구는 면역 및 생리 특성 3,16,21에 상대적인 동물 모델과 인간 사이의 감염이 매우 높은 병렬을 보여줍니다. 차이점은, 그러나, 정상적인 질 식물로 칸디다의 부족과 생쥐의 중립 질 산도를 포함합니다.

여기에서 우리는 질 접종, 질 표본의 신속한 수집, 질 곰팡이 부담 평가 및 세포 추출 / 격리에 대한 조직 준비를 포함하는 마우스 질염 모델의 주요 방법의 일련 보여줍니다. 이것은 질 세척 유체, 곰팡이 부담, 그리고 배수 림프절의 백혈구의 수율의 성분에 대한 대표적인 결과는 다음입니다. anesthetics의 사용으로 세척 샘플의 길이 평가를 위해 같은 생쥐에 여러 시간 지점에서 수령 가능감염 / 식민지. 또한,이 모델은 정의된 호스트 조건 하에서 면역 연구를 허용, 감염을 시작하는 데 아무런 immunosuppressive 요원을 필요하지 않습니다. 마지막으로, 모델 및 각 기술은 여기에 잠재적으로 낮은 여성의 성기 요로 (바이러스성, 기생, 세균)과 각 지역 또는 체계 호스트 방어의 다른 감염증을 조사하는 방법론의 사용에 상승을 줄 수 소개했다.

Protocol

1. 칸디다 albicans와 질 접종 이전 접종에 사흘은 복부를 노출하기 위해 동물을 억제하면서, 낮은 복부에 subcutaneously β – estradiol의 0.1-0.5 MG를 포함 참기름 100 μl를 주입. 사출 사이트에서 누출을 최소화하기 위해 피부에 측면 5-10mm에 대한 바늘을 전진. 아래 복부에있는 에스 트로겐의 피하 행정부는 성기 요로에 근접으로 인해이 모델에 최적입니다. 효과적인 복용이 마우스 변종,…

Discussion

칸디다 질염의 실험 마우스 모델, 설립 역사적 3,4,11,13,16,17,19,21,24 antifungal 요법을 테스트뿐만 아니라 칸디다에 점막 호스트 응답을 연구하기 위해 지난 몇 십년에 사용되고 있습니다 25,37. 프로토콜은 여기 효율적이고 덜 노동 집약적인 방법 통합, 그리고 칸디다 질염의 가장 최적화된 모델 시스템 중 하나가 날짜 설명한 것으로 나타날 제시. 이 기술은…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 R01 AI32556 (NIAID, 건강의 국립 연구소)에 의해 지원되었다. 이 작품은 또한 루이지애나 백신 센터와 Regents의 루이지애나위원회 주최 감염증 연구 남부 루이지애나 연구소에 의해 부분적으로 지원되었다.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Female CBA/J mice Charles River Laboratories 01C38 5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A) National Collection of Pathogenic Fungi, UK NCPF3153  
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547 Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate Sigma-Aldrich E1631 0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone Becton Dickinson 211906 Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution Sigma-Aldrich T8154  
Sabouraud dextrose agar Becton Dickinson 211584  
Collagenase type IV Sigma-Aldrich C5138 0.25%
Dispase Invitrogen 17105-041 1.7 U/ml
Wire mesh screens TWP 060X060S0065W36T No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution Invitrogen 24020-117  
CytoPrep fixative Fisher Scientific 12-570-10 Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65 EMD Chemicals 7054X-85  
Papanicolaou stain OG-6 EMD Chemicals 7052X-85  
Harris’ Alum hematoxylin EMD Chemicals 638A-85  
Isoflurane Baxter Healthcare NDC 10019-773-60 Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber
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References

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Yano, J., Fidel, Jr., P. L. Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis. J. Vis. Exp. (58), e3382, doi:10.3791/3382 (2011).
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