Principais técnicas a serem utilizados na avaliação de<em> Candida</em> Vaginite em um modelo animal experimental são descritos. Os métodos permite uma recolha rápida de amostras vaginais e linfócitos de linfonodos drenantes lombar. Estas técnicas podem dar origem a modelos de ratos de outras doenças na parte inferior do trato genital feminino.
Vulvovaginal candidíase (VVC), causada por espécies de Candida, é uma infecção fúngica do trato genital feminino, que afeta aproximadamente 75% das mulheres saudáveis durante seus anos reprodutivos 18,32-34. Os fatores predisponentes incluem uso de antibióticos, diabetes descontrolado e perturbação nos níveis de hormônios reprodutivos devido à gravidez, contraceptivos orais ou terapias de reposição hormonal 33,34. VVC recorrente (RVVC), definida como três ou mais episódios por ano, afeta a 5 separada a 8% das mulheres sem fatores predisponentes 33.
Um modelo experimental de rato VVC foi estabelecida e utilizado para estudar a patogênese e resposta do hospedeiro mucosa a Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Este modelo também foi empregado para testar potenciais terapias antifúngicas in vivo 13,24. O modelo exige que os animais sejam mantidos em estado de pseudoestrus para optimal Candida colonização / infecção 6,14,23. Sob tais condições, animais inoculados terá carga fúngica vaginal detectável por semanas a meses. Estudos anteriores mostram um paralelo extremamente elevada entre o modelo animal e infecção humana em relação a propriedades imunológicas e fisiológicas 3,16,21. Diferenças, entretanto, incluem a falta de Candida como flora vaginal normal e um pH neutro vaginal nos ratos.
Aqui, nós demonstramos uma série de métodos-chave no modelo de mouse que vaginite incluem inoculação vaginal, rápida coleta de amostras vaginal, avaliação da carga fúngica vaginal, e as preparações para a extração do tecido celular / isolamento. Isto é seguido por resultados representativos para constituintes do lavado vaginal, carga fúngica, e drenagem linfática produz leucócitos nó. Com o uso de anestésicos, as amostras de lavagem podem ser coletados em momentos diversos na mesma camundongos para avaliação longitudinal dainfecção / colonização. Além disso, este modelo não necessita de agentes imunossupressores para iniciar a infecção, permitindo estudos imunológicos em condições host definido. Finalmente, o modelo e cada técnica introduzida aqui poderia potencialmente dar origem a utilização das metodologias para examinar outras doenças infecciosas do trato genital feminino (bacterianas, parasitárias, virais) e respectivas defesas do hospedeiro local ou sistêmica.
Um modelo experimental do rato de Candida vaginite foi estabelecida e usada historicamente para as últimas décadas para estudar a resposta do hospedeiro mucosa a Candida, bem como para testar terapias antifúngicas 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. Os protocolos aqui apresentados incorporam métodos eficientes e menos trabalhoso, e parecem ser um dos sistemas de modelo mais otimizada de Candida vaginite descritas até o momento. Estas técnicas permitem a quantificação rápida da…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pelo R01 AI32556 (NIAID, National Institute of Health). Este trabalho também foi apoiado em parte pela Louisiana Vaccine Center e Louisiana do Sul Instituto de Pesquisas de Doenças Infecciosas patrocinado pelo Conselho de Regentes Louisiana.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |