Техника рассечения иллюстрирует энуклеации глаза мыши для фиксации тканей для выполнения фенотипирование в высокой пропускной способности экранов.
Мышь глаз является важной генетической модели для поступательного изучения человеческих болезней глазной. Blinding заболеваний человека, таких как дегенерация желтого пятна, фоторецептор дегенерации, катаракты, глаукомы, ретинобластома, и диабетической ретинопатии были обобщены в трансгенных мышей. 1-5 большинства трансгенных и нокаутных мышей были получены в лабораториях для изучения без глазных заболеваний, но сохранения генетических ресурсов между системами органов предполагает, что многие из тех же генов также могут играть определенную роль в развитии глаз и болезни. Таким образом, эти мыши представляют собой важный ресурс для открытия новых генотип-фенотип корреляции в глаза. Потому что эти мыши разбросаны по всему миру, трудно приобретать, сохранять, и фенотип их в эффективные, экономически эффективным образом. Таким образом, наиболее высокую пропускную способность экранов офтальмологической фенотипирование ограничены несколько мест, которые требуют на месте, глазные экспертизы для изучения глаза в живых мышей. 6-9 альтернативный подход, разработанный нашей лаборатории является методом для удаленного ткани приобретения, которые могут использоваться в больших или малых масштабах исследования трансгенных мышей глаза. Стандартизированных процедур для видео-хирургической передаче навыков, ткани фиксации и доставки позволяют любой лаборатории, чтобы собрать весь глаз от мутантных животных и отправить их на молекулярном и морфологическом фенотипирования. В этом видео статье мы представляем методы выяснять и передавать как нефиксированные и перфузии фиксированной глазах мышь для удаленного анализа фенотипа.
Большинство трансгенных мышей существуют в лабораториях, которые не рассматривают глаза. Наше видео техника иллюстрирует простой, стандартизированный метод для удаленной передачи хирургических навыков для оптимизации ткани приобретение из лабораторий с небольшим опытом работы с г?…
The authors have nothing to disclose.
Исследования по профилактике слепоты; Бартли J. Mondino MD, директор Jules Stein Eye Institute, Лос-Анджелесе, и Рамиро Рамиреса-Солис, Джеки белый, и Жанна Estabel в Sanger института Wellcome Trust генома Campus. Это исследование соответствует ARVO Заявление для использования животных в офтальмологический и визуальных исследований.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
---|---|---|---|
Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |