טכניקת הנתיחה ממחישה enucleation של עין העכבר לקיבוע רקמות כדי לבצע phenotyping במסכי תפוקה גבוהה.
עין העכבר היא מודל גנטי חשוב למחקר translational של מחלת עיניים אנושית. מחלות מסנוורות בבני אדם, כגון ניוון מקולרים, ניוון photoreceptor, קטרקט, גלאוקומה, רטינובלסטומה, רטינופתיה סוכרתית וכבר סכם בעכברים מהונדסים. 1-5 עכברים הטרנסגניים ונוקאאוט רוב נוצרו על ידי מעבדות ללמוד מחלות שאינן לרפואת עיניים, אבל שימור גנטי בין מערכות איברים עולה כי רב מאותם הגנים עלולים גם לשחק תפקיד בהתפתחות מחלה ועינית. לפיכך, העכברים האלה מייצגים משאב חשוב לגילוי מתאמים חדשים גנוטיפ-פנוטיפ בעיניים. כי עכברים אלו מפוזרים על פני הגלובוס, קשה לרכוש, לתחזק ופנוטיפ בצורה יעילה וחסכונית. לפיכך, מסכי phenotyping רפואת עיני תפוקה הגבוהה ביותר מוגבלים לכמה מקומות שדורשים באתר, מומחיות העינים לבחון את העיניים בעכברים חיים. 6-9 גישה חלופית שפותחה על ידי המעבדה שלנו היא שיטה לרקמות רכישה מרחוק שניתן להשתמש בו בסקרים גדולים או בקנה מידה הקטן של עיני עכבר מהונדסות. נהלים סטנדרטיים להעברת וידאו מבוסס כירורגית מיומנות, קיבעון רקמות, ומשלוח לאפשר לכל מעבדה כדי לאסוף עיניים שלמות מבעלי חיים מוטנטים ולשלוח אותם לphenotyping מולקולרי ומורפולוגי. במאמר זה וידאו, אנו מציגים טכניקות לenucleate ולהעביר עיני עכבר קבועות גם מבולבלות וזלוף לניתוחי phenotyping מרוחקים.
עכברים הטרנסגניים ביותר קיימים במעבדות שלא לבחון את העיניים. טכניקת הווידאו שלנו ממחישה שיטה פשוטה, סטנדרטית להעברת מיומנות כירורגית מרחוק כדי לייעל את רכישת רקמה ממעבדות עם ניסיון מועט עם העיניים. טכניקה זו עוזרת להתגבר על וידאו מכשלה עיקרית בphenotyping תפוקה גבוהה, שה…
The authors have nothing to disclose.
מחקר כדי למנוע עיוורון; Bartly ג'Mondino MD, מנהל מכון עיני ז'ול שטיין, אוניברסיטת קליפורניה, ורמירו רמירז-סוליס, ג'קי הלבן, וז'אן Estabel במכון סנגר, קמפוס הגנום Wellcome Trust. מחקר זה תואם את הצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים ברפואת עיניים ומחקר חזותי.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
---|---|---|---|
Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |