老鼠的眼睛剜除术的远程高通量的表型
Summary
的解剖技术说明组织固定，进行表型的高通量筛选老鼠的眼睛剜除术。
Abstract
老鼠的眼睛是一个重要的遗传模型的平移人类眼科疾病的研究。在转基因小鼠在人类的致盲性疾病，如黄斑变性，光感受器变性，白内障，青光眼，视网膜母细胞瘤，糖尿病性视网膜病变已概括。1-5大多数转基因和基因敲除小鼠的实验室研究已产生非眼科疾病，但器官系统之间的遗传保护，许多相同的基因也可能在眼发育和疾病发生中发挥作用。因此，这些老鼠的眼睛发现新的基因型与表型的相关性是一个重要的资源。由于这些老鼠分散在世界各地，它是难以获取，维护和表型以高效，成本效益的方式。因此，大多数高通量眼表型屏幕被限制在检查现场，眼科专业知识，需要几个地点的眼睛在活体小鼠6-9本实验室所开发的另一种方法是远程组织收购，可用于转基因小鼠的眼睛在或大或小规模的调查方法。基于视频的手术技术转移，组织固定和运输的标准化程序允许任何实验室收集整个眼睛突变的动物，并将它们发送的分子和形态学表型。在这个视频文章中，我们提出了远程表型分析技术enucleate和转让不固定，并灌注固定鼠标的眼睛。
Protocol
1。在不固定的标本钝性分离：老鼠的眼睛剜除术拉开眼睑改善及接触后的地球（眼球）表面。 将弯曲敷料镊子背后（下）的地球轨道（眼圈）。马哈詹Sharptip敷料镊子尖这一步更容易（见材料和试剂表）是一个自定义的仪器。 关闭的镊子和把握的轨道结缔组织和视神经背后的全球，同时小心避免挤压全球。 轻轻向上拉镊子和勇敢的眼球从眼眶。白线样组织是视?…
Discussion
大多数转基因小鼠中存在的不检查眼睛的实验室。我们的视频技术，说明了一个简单的，标准化的方法，用于远程手术技巧转移到优化组织收购，从实验室经验少用眼。此视频技术可以帮助克服在高通量的表型，这是由于非标准化组织收集和固定方法，防止有意义的比较表型和分子生物学研究的专业网站的使用数量有限的一个主要缺陷。任何新的远程实验室和技术人员，建立和保持质量控制，重?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
研究以预防失明，主任朱尔斯·斯坦眼科研究所，加州大学洛杉矶分校Bartly J. Mondino MD和拉米罗·拉米雷斯 – 索利斯，杰奎白，和珍妮Estabel的，威康信托基金会桑格研究所基因组校园。本研究符合ARVO声明眼科和视觉研究中使用动物。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
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Mouse Eye EnucleationRemote High-throughput PhenotypingGenetic ModelOphthalmic DiseaseMacular DegenerationPhotoreceptor DegenerationCataractGlaucomaRetinoblastomaDiabetic RetinopathyTransgenic MiceGenotype-phenotype CorrelationsOphthalmic PhenotypingSurgical Skill TransferMolecular PhenotypingMorphological Phenotyping
Cite This Article
Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping. J. Vis. Exp. (57), e3184, doi:10.3791/3184 (2011).