Canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de Wharton

Summary

Un protocolo para la canalización de la glándula salival submaxilar del ratón a través de conductos de Wharton se describe. Para este experimento, la solución de azul tripán se usa como un tintorero para demostrar cómo esta técnica efectiva entrega infusiones en la glándula blanco, y sugerir la fiabilidad de este nuevo enfoque como un potencial clínico de drogas / terapia celular para la regeneración de las glándulas salivales.

Abstract

Hipofunción de las glándulas salivales grave se encuentra con frecuencia en pacientes con síndrome de Sjögren y los que reciben la irradiación terapéutica en la cabeza y región del cuello para el tratamiento del cáncer. Ambos grupos de pacientes experimentan síntomas tales como la xerostomía (boca seca), disfagia (deterioro de la masticación y deglución), caries dentales graves, alteración del gusto, orofaríngea infecciones (candidiasis), mucositis, dolor y malestar.

Un enfoque innovador de la medicina regenerativa para el tratamiento de la glándula salival hipofunción se especula en RS Redman, Mezey E et al 2009:. Células madre pueden ser depositados directamente por la canalización en la glándula como un método potente para la reactivación de las funciones de las personas con discapacidad órgano. Es de suponer que las células madre migran extranjeros se diferencian en células glandulares que funcionan como parte de la glándula salival de acogida. Además, esta técnica de la canalización es un método de entrega rápido y efectivo para la aplicación clínica de transferencia de genes.

Aquí se ilustran los pasos necesarios para realizar el procedimiento de canalización en el ratón de la glándula salival submaxilar a través del conducto de Wharton (Fig. 1). C3H ratones (Charles River, Montreal, Quebec, Canadá) se utilizan para este experimento, que se han mantenido bajo condiciones de limpieza convencionales en el centro de la Universidad McGill de recursos animales. Todos los experimentos han sido aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad y estaban en conformidad con las directrices del Consejo Canadiense de los Animales.

Para este experimento, una solución de azul tripán se infunde en la glándula a través de la abertura del conducto de Wharton con una jeringa de insulina con una aguja de calibre 29 encerrados dentro de un tubo de polietileno. Posteriormente, el ratón se diseca para demostrar que las infusiones migrado con éxito dentro de la glándula.

Protocol

1. Descripción del procedimiento Por vía subcutánea inyectar 1 l / g de peso corporal de 0,5 mg / ml monohidrato de sulfato de atropina (Cat # 11330, Fluka, EE.UU.) en cada ratón para evitar que las secreciones salivales de interrumpir el movimiento de las infusiones. Anestesiar a cada ratón con un peso corporal l / g de 100 mg / ml de ketamina y 20 mg / ml de solución de xilacina (Phoenix Científico, AR, EE.UU.) inyectó intraperitoneal (IP) Coloque el rat…

Discussion

Una dificultad con este método es la canalización para evitar el reflujo de la solución inyectada. Aunque la solución de azul tripan ha migrado temporalmente en la glándula salival con éxito, la secreción de la saliva puede interferir con las infusiones y causar reflujo de la solución de azul tripano de la glándula. Como medida de precaución, además de utilizar la atropina para inhibir la secreción de saliva, la cánula de polietileno deben permanecer en el conducto de Wharton y el émbolo de la jeringa cabo…

Materials

Name of the reagent	Type	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250