Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton's

Summary

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Abstract

Ernstige speekselklier hypofunction wordt vaak gevonden bij patiënten met het syndroom van Sjögren en degenen die die therapeutische bestraling in hun hoofd en nek regio's voor de behandeling van kanker. Beide groepen patiënten ervaren symptomen, zoals xerostomie (droge mond), dysfagie (verminderde kauwen en slikken), ernstige cariës, veranderde smaak, oro-faryngeale infecties (candidiasis), mucositis, pijn en ongemak.

Een innovatieve benadering van de regeneratieve geneeskunde voor de behandeling van de speekselklieren hypo-functie wordt gespeculeerd in de RS Redman, E Mezey et al. 2009:. Stamcellen kunnen direct worden afgezet door cannulatie in de klier als een krachtige methode in de heropleving van de functies van de verminderde orgel. Vermoedelijk zal de gemigreerde vreemde stamcellen differentiëren in kliercellen om te functioneren als onderdeel van de gastheer speekselklier. Ook deze canulatie techniek is een hulpmiddel en effectieve levering methode voor klinische genoverdracht toepassing.

Hier hebben we illustreren de stappen die betrokken zijn bij het ​​uitvoeren van de cannulatie procedure op de muis submandibulaire speekselklier via de Wharton's kanaal (afb. 1). C3H muizen (Charles River, Montreal, QC, Canada) worden gebruikt voor dit experiment, die zijn onder schone conventionele omstandigheden bewaard op de McGill University dier resource center. Alle experimenten zijn goedgekeurd door de Universiteit Animal Care Comite en waren in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care.

Voor dit experiment, is een trypan blauwe oplossing toegediend in de klier door de opening van het kanaal Wharton's met behulp van een insuline spuit met een 29-gauge naald verpakt in een polyethyleen buis. Vervolgens wordt de muis ontleed aan te tonen dat de infusies gemigreerd succesvol in de klier.

Protocol

1. Procedurele Beschrijving Subcutaan injecteren 1 pi / g lichaamsgewicht van 0,5 mg / ml atropinesulfaat monohydraat (Cat # 11330, Fluka, USA) in elke muis om de speekselvorming voorkomen dat het verstoren van de beweging van de infusies. Verdoven elke muis met een ul / g lichaamsgewicht van een 100 mg / ml ketamine en 20 mg / ml xylazine (Phoenix Scientific, AR, USA)-oplossing geïnjecteerd intraperitoneale (IP) Plaats de muis op een custom-made plastic platform…

Discussion

Een moeilijkheid het gebruik van deze canulatie methode is om te voorkomen dat het terugstromen van de geïnjecteerde oplossing. Zelfs als de trypan blauwe oplossing is tijdelijk gemigreerd naar de speekselklier met succes, kan het speeksel secretie interfereren met de infusen en de oorzaak terugstroming van de trypan blauwe oplossing uit de klier. Uit voorzorg, naast het gebruik van atropine tot afgifte van speeksel remmen, moet de polyethyleen canule blijft in het kanaal van de Wharton en de zuiger van de spuit aangeh…

Materials

Name of the reagent	Type	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250