Bu makale, insan embriyonik kök hücre popülasyonlarının insan hepatik endoderm üretimi üzerinde durulacaktır.
Modelleme insan ilaç zehirlenmesi ilerlemelere rağmen, birçok bileşikleri klinik çalışmalar sırasında beklenmeyen yan etkiler nedeniyle başarısız olur. Klinik çalışmaların maliyeti büyük, bu nedenle daha fazla öngörü toksikoloji ekranlarında geliştirilen ve ilaç geliştirme (Greenhough ve ark 2010) başlarında konuşlanmış olması çok önemlidir. İnsan hepatositler ilaç toksisitesinin değerlendirilmesi için altın standart model temsil eder, ancak değişken fonksiyon gösteren sınırlı bir kaynaktır. Bu nedenle, ölümsüzleştirilmiştir hücre hatları ve hayvansal doku modelleri kullanımı rutin bolluğu nedeniyle istihdam edilmektedir. Iki kaynaktan bilgilendirici olsa da, yetersiz fonksiyonu, türün değişkenliği ve / veya kültür istikrarsızlık (Dalgetty ve ark 2009) sınırlıdır. Pluripotent kök hücreler (PSC'leri) hücreleri gibi insan hepatosit cazip bir alternatif kaynak (HLCs) (Medine ve ark 2010). PSC'ler yetişkin bulunan tüm somatik hücre türleri için kendini yenileme ve farklılaşma yeteneğine sahiptirler ve böylece temsilfarklılaşmış hücrelerin bir potansiyel olarak bitmez tükenmez bir kaynak. Biz otomasyon ve verim fonksiyonel insan HLCs (Fletcher ve ark 2008; Hannoun ve ark 2010; Payne ve ark 2011 ve Hay ve ark 2011 Hay ve ark 2008) için uygun, yüksek verimli, basit bir prosedür geliştirdik. Biz teknoloji, hastalık modelleme, ekstra bedensel cihazlar inşaat ve muhtemelen hücre nakli tedaviler ilaç keşfi için HLCs ölçeklenebilir üretimine yol olacağına inanıyorum.
Biz insan HLCs ölçeklenebilir seviyelerini oluşturmak için basit, homojen ve in vitro yüksek oranda tekrarlanabilir bir model geliştirdik . Bizim modelimiz bir dizi dış işbirliği laboratuarları tarafından onaylanmıştır. Biz rutin olarak gelişim belirteçler ve karaciğer özel fonksiyonel testlerinin (çoğu ticari olarak mevcuttur) ev araç kutusu kullanılarak kök hücre elde edilen HLCs karakterize eder. Sürecinde önemli aşamaları şunlardır: bakım pluripotency kök hücre, kök hücre…
The authors have nothing to disclose.
Dr Hay RCUK Bursu tarafından desteklenen Dr West Cerrahi Anabilim Dalı tarafından desteklenen, Dr Medine BHF Core Fonundan hibe tarafından desteklenen, Sayın Baltasar Lucendo-Villarin bir MAM Doktora Studenship tarafından desteklenmiştir. Dr Zhou, Çin Hükümeti bursu ile desteklenmiştir.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays