Cet article se concentrera sur la génération de l'endoderme hépatiques humaines embryonnaires humaines à partir des populations de cellules souches.
Malgré les progrès dans la toxicité des médicaments de modélisation humaine, de nombreux composés échouent lors des essais cliniques en raison d'effets secondaires imprévus. Le coût des études cliniques sont considérables, il est donc essentiel que plusieurs écrans toxicologie prédictive sont développées et déployées au début du développement de médicaments (Greenhough et al 2010). Hépatocytes humains représentent le modèle actuel de l'or standard pour évaluer la toxicité des médicaments, mais ils sont une ressource limitée qui présentent fonction variable. Par conséquent, l'utilisation de lignées cellulaires immortalisées et des modèles de tissus animaux sont couramment employées en raison de leur abondance. Alors que les deux sources sont informatifs, ils sont limités par la fonction pauvres, la variabilité des espèces et / ou d'instabilité dans la culture (Dalgetty et al 2009). Les cellules souches pluripotentes (PSC) sont une source intéressante alternative d'hépatocytes humains comme des cellules (CLH) (Medine et al 2010). CPP sont capables d'autorenouvellement et de différenciation à tous les types de cellules somatiques dans l'adulte et représentent ainsiune source potentiellement inépuisable de cellules différenciées. Nous avons développé une procédure qui est simple, très efficace, se prêtent à l'automatisation et les rendements fonctionnels CLH humaine (Hay et al 2008; Fletcher et al 2008; Hannoun et al 2010; Payne et al 2011 et Hay et al 2011). Nous croyons que notre technologie peut conduire à la production évolutive de CLH pour la découverte de médicaments, la modélisation des maladies, la construction d'appareils extra-corporelle et, éventuellement, les thérapies cellulaires de transplantation base.
Nous avons développé un modèle simple, homogène et hautement reproductibles in vitro pour générer des niveaux évolutifs du CLH humaine. Notre modèle a été validé par un certain nombre de laboratoires externes collaborent. Nous avons régulièrement de caractériser des cellules souches dérivées CLH utilisant notre boîte à outils dans la maison de marqueurs spécifiques de développement et des tests fonctionnels du foie (dont la plupart sont disponibles dans le commerce). Les étapes essentielles…
The authors have nothing to disclose.
Dr Hay a été soutenue par une bourse de RCUK, le Dr West a été soutenu par le Département de chirurgie, le Dr Medine a été soutenu par une subvention du Fonds de base BHF, M. Baltasar Lucendo-Villarin a été soutenue par une MRC Studenship doctorat. Dr Zhou a été soutenu par une bourse du gouvernement chinois.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays