Caratterizzazione del isolata, ventilata e polmone mouse Instrumented perfusi con flusso pulsatile
Summary
Il protocollo seguente delinea il processo di isolamento, ventilazione e strumentazione polmoni del mouse su misura stabile o pulsatile vascolare polmonare di pressione del flusso di relazioni al fine di quantificare gli effetti del flusso sanguigno, flusso d'aria, i cambiamenti delle vie aeree e sui cambiamenti vascolari post-carico del ventricolo destro.
Abstract
L'isolato, ventilato e strumentato preparazione polmone del mouse permette di costante e pulsatile vascolare polmonare di pressione del flusso di relazioni deve essere misurata con un controllo indipendente sulla portata polmonare arteriosa, frequenza delle forme d'onda di flusso, pressione delle vie aeree e la pressione atriale sinistra. Resistenza vascolare polmonare è calcolata in base multi-punto, la pressione costante flusso di curve; impedenza vascolare polmonare viene calcolata la pressione del flusso pulsatile curve ottenute in una gamma di frequenze. Come ormai riconosciuto clinicamente, l'impedenza è una misura superiore del post-carico del ventricolo destro di resistenza in quanto include gli effetti della compliance vascolare, che non sono trascurabili, soprattutto nella circolazione polmonare. Tre parametri importanti di impedenza – zero hertz impedenza Z 0, la caratteristica di impedenza Z C, e l'indice di riflessione delle onde R W – fornire una conoscenza distale delle arterie sezione trasversale a disposizione per il flusso, prossimale rigidità arteriosa e l'impedenza a monte ea valle mancata corrispondenza, rispettivamente. Tutti i risultati ottenuti in isolato, ventilato e polmoni perfusi sono indipendenti dal tono simpatico del sistema nervoso, lo stato del volume e gli effetti dell'anestesia. Abbiamo usato questa tecnica per quantificare l'impatto di embolia polmonare e l'ipossia cronica sulla resistenza e impedenza, e di distinguere tra i siti di azione (cioè, prossimale distale rispetto) di agenti vasoattivi e le malattie usando la dipendenza della pressione di Z C. Inoltre, quando queste tecniche sono utilizzate con i polmoni di ceppi di topi geneticamente modificati, gli effetti a livello molecolare dei difetti vascolari polmonari struttura e la funzione può essere determinato.
Protocol
Discussion
Passaggi critici della chirurgia
E 'fondamentale che si fa attenzione quando si taglia la gabbia toracica lontano dai polmoni. I polmoni devono essere completamente esposti e disinibito da parte dei tessuti circostanti durante l'inflazione, ma non danneggiate durante il processo di isolamento. L'uso di un oggetto piatto come il back-end della pinza può essere utilizzata per tenere il polmone dalla parete toracica modo che ci sia un percorso chiaro per le forbici per tagliare. Un al…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questa ricerca è stata finanziata dal National Institutes of Health R01HL086939 concedere (NCC).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 ml syringe | Fisher Sci | 14-829-10F | ||
| 10 ml syringe | Fisher Sci | 14-823-2A | ||
| 60 ml syringe | Fisher Sci | 13-689-8 | ||
| RPMI with GLN 6/PK | Fisher Sci | MT10040CV | ||
| Bottle Top Filters | Fisher Sci | 09-761-57 | ||
| Ficoll PM 70 | Sigma-Aldrich | F2878-100g | ||
| Heparin | Sigma-Aldrich | |||
| Y27632 | Sigma-Aldrich | Y0503 | ||
| Angled Ball Iris scissors | Fine Science Tools | 14109-09 | ||
| Vannas Spring Scissors – 4mm Blades | Fine Science Tools | 15018-10 | ||
| Fine Iris Scissors – straight | Fine Science Tools | 14106-09 | ||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | ||
| Dumont Medical Biology Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | ||
| Lauda E100 ECO-line 003 | VWR | Comparable to Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922 | ||
| IL-1 Isolated perfused mouse lung system | Harvard Apparatus | 739904 | ||
| Blood Pressure Transducer P75 for PLUGSYS Module | Harvard Apparatus | 730020 | ||
| TS410 Flow Modules | Transonic | TS410 | ||
| ME 4 PXN Precision PXN Inline Flowsensors | Transonic | ME 4 PXN | ||
| Cole-Parmer Multi-Syringe Pumps | Cole-Parmer | EW-74900-20 | ||
| Nembutal 50MG/ML 20ML Vial | Amatheon |
References
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