Caractérisation des isolés, ventilés et instrumentés poumons de souris perfusées avec un flux pulsatile
Summary
Le protocole suivant décrit le processus d'isolement, de ventilation et d'instrumenter les poumons de souris pour mesurer stable ou pulsatile vasculaire pulmonaire pression-débit des relations afin de quantifier les effets de la circulation sanguine, circulation de l'air, les changements des voies aériennes et sur les modifications vasculaires postcharge ventriculaire droite.
Abstract
Les isolés, ventilés et instrumentés préparation des poumons de souris permet constante et pulsatile vasculaire pulmonaire pression-débit relations pour être mesurée avec un contrôle indépendant sur le débit artériel pulmonaire, forme d'onde de débit, pression des voies aériennes et de la pression auriculaire gauche. La résistance vasculaire pulmonaire est calculé en fonction multi-point, une pression constante des flux courbes; impédance vasculaire pulmonaire est calculée à partir pulsatile pression-débit courbes obtenues lors d'une gamme de fréquences. Comme maintenant reconnu cliniquement, l'impédance est une mesure supérieure de la postcharge ventriculaire droite que la résistance parce qu'il inclut les effets de la compliance vasculaire, qui ne sont pas négligeables, en particulier dans la circulation pulmonaire. Trois paramètres importants de l'impédance – le zéro hertz impédance Z 0, l'impédance caractéristique Z, C et l'indice de réflexion des ondes R W – donnent un aperçu de distale artérielle transversale superficie disponible pour l'écoulement, la rigidité artérielle proximale et l'impédance amont-aval décalage, respectivement. Tous les résultats obtenus dans les régions isolées, ventilées et perfusées poumons sont indépendants de ton système nerveux sympathique, l'état du volume et les effets de l'anesthésie. Nous avons utilisé cette technique pour quantifier l'impact de l'embolie pulmonaire et de l'hypoxie chronique sur la résistance et l'impédance, et de différencier les sites d'action (c.-à-proximale distale vs) d'agents vasoactifs et de la maladie en utilisant la pression de la dépendance de Z C. En outre, lorsque ces techniques sont utilisées avec les poumons des souches génétiquement modifiées de la souris, les effets de défauts au niveau moléculaire sur la structure et la fonction vasculaire pulmonaire peut être déterminée.
Protocol
Discussion
Les étapes critiques dans la chirurgie
Il est essentiel que l'on prend soin lors de la coupe de la cage thoracique loin dans les poumons. Les poumons doivent être complètement dégagées et sans entraves par les tissus environnants pendant l'inflation mais pas endommagés pendant le processus d'isolement. L'utilisation d'un objet plat comme la partie arrière de la pince peut être utilisée pour maintenir les poumons loin de la paroi thoracique afin qu'il y ait une v…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette recherche a été financée par le National Institutes of Health octroi R01HL086939 (CCN).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 ml syringe | Fisher Sci | 14-829-10F | ||
| 10 ml syringe | Fisher Sci | 14-823-2A | ||
| 60 ml syringe | Fisher Sci | 13-689-8 | ||
| RPMI with GLN 6/PK | Fisher Sci | MT10040CV | ||
| Bottle Top Filters | Fisher Sci | 09-761-57 | ||
| Ficoll PM 70 | Sigma-Aldrich | F2878-100g | ||
| Heparin | Sigma-Aldrich | |||
| Y27632 | Sigma-Aldrich | Y0503 | ||
| Angled Ball Iris scissors | Fine Science Tools | 14109-09 | ||
| Vannas Spring Scissors – 4mm Blades | Fine Science Tools | 15018-10 | ||
| Fine Iris Scissors – straight | Fine Science Tools | 14106-09 | ||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | ||
| Dumont Medical Biology Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | ||
| Lauda E100 ECO-line 003 | VWR | Comparable to Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922 | ||
| IL-1 Isolated perfused mouse lung system | Harvard Apparatus | 739904 | ||
| Blood Pressure Transducer P75 for PLUGSYS Module | Harvard Apparatus | 730020 | ||
| TS410 Flow Modules | Transonic | TS410 | ||
| ME 4 PXN Precision PXN Inline Flowsensors | Transonic | ME 4 PXN | ||
| Cole-Parmer Multi-Syringe Pumps | Cole-Parmer | EW-74900-20 | ||
| Nembutal 50MG/ML 20ML Vial | Amatheon |
References
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