免疫细胞化学是一个功能强大的方法来确定是否存在,亚细胞定位和兴趣在培养的细胞抗原的相对丰度。该协议提出了一个易于遵循的一系列步骤,使一个保护抗体染色。
免疫细胞化学是一个非常强大的,相当简单的方法,确定存在的,亚细胞定位,利益,最常见的在培养细胞中的蛋白质,的抗原的相对丰度。此协议提供了一个易于遵循一系列的措施,将使研究人员能够节省小学和中学的抗体,而其染色质量高,重现性好定性和定量数据。这个协议有两个方面,以帮助保护抗体染色所需的量。其一,细胞是生长在小的,圆形盖玻片,放置在一个组织的文化板块井。盖玻片上的细胞固定后,可以删除从该板块的水井。抗体染色,与细胞的盖玻片上的封口膜的小滴的抗体溶液倒到第二件的封口膜覆盖,以防止干燥。使用这种方法,只〜25μl抗体溶液的需要为每个盖玻片(或样品)进行染色。本协议描述了人类神经干/前体细胞(hNSPCs)免疫,但可用于许多其他类型的细胞。
这一协议描述为hNSPCs的免疫程序,最大限度地减少了所需的抗体量,并提供可靠的的细胞染色。所描述的程序是最好的细胞内的抗原,但可以修改染色细胞表面的分子或增强细胞骨架的染色。
作者要感谢在儿童医院,奥兰治县研究院提供封口膜染色技术的初步指导hNSPC文化和加里Bassell博士在埃默里大学的菲利普H ·施瓦茨博士国家人类神经干细胞资源。