Способность манипулировать человеческой нейронных стволовых / клеток-предшественников (hNSPCs) в пробирке позволяет исследовать их полезность в качестве клеточных трансплантатов для использования в терапевтических целях, а также изучить человеческие развития нервной системы. Этот протокол представляет метод культивирования и пассажи hNSPCs в надежде на повышение воспроизводимости человеческого исследования стволовых клеток.
Abstract
Способность манипулировать человеческой нейронных стволовых / клеток-предшественников (hNSPCs) в пробирке предоставляет средства для изучения их полезность как клеточных трансплантатов для использования в терапевтических целях, а также для изучения многих фундаментальных процессов человеческого развития нервной системы и патологии. Этот протокол представляет собой простой метод культивирования и пассажи hNSPCs в надежде на стандартизацию этой техники и повышения воспроизводимости человеческого исследования стволовых клеток. HNSPCs мы используем были изолированы от трупного послеродовой коры мозга, о человеческом нейронных стволовых клеток ресурсов и выросли как приверженец культур на колбы покрыты фибронектина (Palmer и др., 2001;.. Шварц и др., 2003). Мы культуре нашей hNSPCs в DMEM: F12, свободной от сыворотки среде с EGF, FGF и PDGF и прохождение их 1:02 примерно раз в семь дней. Используя эти условия, большинство клеток в культуре поддерживать морфологии биполярных и выражать маркеры недифференцированных нервные стволовые клетки (например, нестин и Sox2).
Protocol
Примечание: Для рутинной культивирования наших hNSPCs, мы меняем 50-100% от средств массовой информации каждый день, и обычно их прохождения 1:02 раз в неделю. Медиакультуры содержит 20% BIT-9500, 1X антибиотик / противогрибковым, и факторы роста (EGF, FGF и PDGF каждый на 40 нг / мл) в DMEM: F12 СМИ базу. <p clas…
Discussion
Мы обнаружили, что этот протокол обеспечивает надежную культур hNSPCs. Одним из важнейших факторов для наших клеток является то, что они должны быть как достаточно плотная культуры и не может быть пассировать до того, что клетки являются редкими. В наших руках, редкие культуры растут очень медленно и?…
Acknowledgements
Авторы выражают глубокую признательность д-р Филип Х. Шварца о человеческом нейронных ресурсов стволовых клеток в детской больнице, Orange County научно-исследовательский институт для обеспечения hNSPCs и начального обучения на своем культивирования.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin)
Reagent
Stem Cell Technologies
09500
Antibiotic-Antimycotic
Reagent
Invitrogen
15240-062
DMEM:F12 (1X)
Reagent
Invitrogen
11330-032
EMEM (1X)
Reagent
Mediatech
MT-10-010-CV
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fetal Bovine Serum
Reagent
Invitrogen
10437-028
FGF, human basic recombinant
Reagent
Peprotech
100-18B
PDGF-AB
Reagent
Peprotech
100-00AB
EGF, human recombinant
Reagent
BD Biosciences
CB40052
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Cell Culture Flask, 25 cm2
Tool
Corning
10-126-28
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Fibronectin, human, natural
Reagent
BD Biosciences
CB40008A
Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Human Neural Stem/Precursor Cells
Cells
National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm
Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture.Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).