在这里,我们展示了一个协议,进行活细胞染色,可用于检测HEK293T细胞表面上的气味受体方便。此外,它也可能被用来检测其他化学感受受体或GPCRs的表面表达。
是公认的嗅觉感的生动的气味世界。在小鼠的嗅觉是介导的由约1200克蛋白偶联受体(GPCRs)1,假设绑定挥发的气味分子,并通过与G蛋白耦合Gαolf的胞内信号转换成细胞外信号的剧目。绑定的气味受体被认为是按照组合规则,也就是说,一个气味可能几个受体绑定和一个受体可以绑定几个气味不同程度2。生化,信令和配体结合研究已方便进行最GPCRs的使用异种细胞。但是使用的气味受体的研究,异种细胞,排除了很长一段时间,因为他们在转没有出口到表面。 Saito等人已经证明单膜通过受体运输蛋白(RTP)的家庭伴侣显示在嗅感觉神经元和交通气味受体在异种细胞的表面,当联合一起转了3伴侣的行为表达增强。要利用异种细胞的受体进行生化检测,必须先确定,如果受体的细胞株显示了强大的表面表达。这可以检测高表达的受体与由活细胞染色,荧光标签或专门的外域外域标记的伴侣RTP1S。在这里,我们展示了一个协议,进行活细胞染色,可用于检测HEK293T细胞表面上的气味受体方便。此外,它也可能被用来检测其他化学感受受体或GPCRs的表面表达。
每一步都必须小心进行,以确保突出和独特的表面染色。整个染色过程中,必须在寒冷的开展(冰),和盖玻片奠定托盘必须被冷却之前使用,以确保细胞活路。此外,固定做表面染色过程结束。这是内部染色,其中固定先染色通透细胞膜的小学和中学抗体形成鲜明对比的。盖玻片暴露在空气中的时间必须最小化,以防止从干涸的细胞,因此盖玻片与抗体的解决方案的分层,转让盖玻片洗涤液,?…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢阅读这篇稿子的关键松波实验室的成员。