Bryostatin의 1/Ionomycin에 의해 종양 반응 T 세포의 생체내 전 확장 및 일반 감마 체인 크린 시토킨 제제
Summary
에 대한 효율적인 프로토콜<em> 예 생체내</em종양 – 배수 림프절이나 종양 베어링 호스트의 다른 이차 림프 조직에서 종양 반응 T 세포의> 확장을 설명합니다. 이 프로토콜은 선택 유방암의 입양 immunotherapy에 사용하기 위해 종양 특정 T 세포를 확장합니다.
Abstract
이것은 유방암 환자들은 종양의 1,2에 대한 기존의 면역 반응을보고했다. 그러나, 이러한 면역 반응은 유방암의 개발이나 재발에 대한 완벽한 보호를 제공하기 위해 실패합니다. 종양 반응 T 세포의 빈도를 증가하여이 문제를 극복하기 위해 입양 immunotherapy가 채용되었습니다. 프로토콜의 다양한 종양 관련 T 세포의 확장을 위해 사용되었습니다. 이러한 프로토콜은, 그러나, 항원에 특정한 T 세포의 활성화를위한 종양 항원의 전의 생체내의 사용을 제한하고 있습니다. 아주 최근에, 이러한 IL – 2, IL – 7, IL – 15, IL – 21과 같은 일반 감마 체인 크린 시토킨는 안티 종양 면역 반응 3의 강화를 위해 단독으로 또는 조합하여 사용되었습니다. 그러나 제제는 종양 반응 T 세포의 확장에 가장 적합한 것이 무엇인지에 대해서는 아직 알려진 바가 없다. 여기서 우리는 선택 활성화 및 유방암의 입양 T 세포 치료에 사용하기 위해 HER-2/neu 양성 유방 암종의 FVBN202 유전자 변형 마우스 모델에서 종양 반응 T 세포의 확장을위한 프로토콜을 제시한다. 프로토콜은 16 시간 동안 종양 항원의 부재에서 bryostatin-1/ionomycin (B / I)와 IL – 2와 T 세포의 활성화를 포함하고 있습니다. B / I 활성화 세포내 신호를 모방 것을 각각 4, 단백질 키나제 C의 활동과 세포 내 칼슘을 증가시켜 T 세포 활성화의 결과. 없는 T 세포를 죽이는 동안이 프로토콜은 특히 종양 특정 T 세포를 활성화한다. B / I – 활성 T 세포는 24 시간 동안 IL – 7과 IL – 15과 교양 그리고 IL – 2 펄스입니다. 24 시간 후에, T 세포가와 분할을 씻어하고, 양식 아르 IL – 7 + 추가 4 일간 IL – 15. 전 생체내 확대 T 세포의 종양 – 특이성 및 안티 종양 효능이 결정됩니다.
Protocol
Discussion
효과기 안티 종양 기능으로 종양 반응 T 세포의 선택적 확장은 B를 사용하여 제안된 프로토콜에 의해 얻을 수있는 I / 활성화 및 감마 체인 크린 시토킨 IL – 2, IL – 7과 IL – 15 예 생체내 확장. IL – 2 항원에 특정한 T 세포의 분화와 확장을 지원할 수 T 세포 성장 인자이지만, IL – 7은 T 세포의 apoptosis를 억제하고 확장하는 동안 그들의 생존을 지원할 수 있습니다. IL – 15은 T 세포 입양 요법 9-11시…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH R01 CA104757 그랜트 (MH Manjili)에 의해 지원되었다. 우리는 기꺼이 VCU 메시 암 센터의 지원과 암 연구에 대한 연방 재단 인정합니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
References
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