ブリオスタチンの1/Ionomycinによる腫瘍反応性T細胞のex vivoでの拡張と共通γ鎖のサイトカインの策定
Summary
のための効率的なプロトコル<em>生体外で</em腫瘍所属リンパ節または腫瘍を持つホストの他の二次リンパ組織から腫瘍反応性T細胞の>拡張が記述されています。このプロトコルは、選択的に乳がんの養子免疫療法で使用するための腫瘍特異的T細胞を拡大する。
Abstract
それは、乳がんの患者は腫瘍の1,2に対する既存の免疫応答を有することが報告されました。しかし、そのような免疫応答は、乳がんの開発または再発に対する完全な保護を提供するために失敗する。腫瘍反応性T細胞の頻度を増やすことによってこの問題を克服するために、養子免疫療法が採用されている。さまざまなプロトコルは、腫瘍特異的T細胞の拡大のために使用されている。これらのプロトコルは、しかしながら、抗原特異的T細胞の活性化のための腫瘍抗原のex vivoでの使用に制限されています。ごく最近、このようなIL – 2、IL – 7、IL – 15、およびIL – 21などの一般的なγ鎖のサイトカインは、抗腫瘍免疫応答3の強化のために単独でまたは組み合わせて使用されている。しかし、製剤は腫瘍反応性T細胞の拡大のために最もよく働くなるかは明らかではない。ここでは、選択的活性化と乳がんの養子T細胞療法で使用するためにHER-2/neu陽性乳癌癌のFVBN202トランスジェニックマウスモデルからの腫瘍反応性T細胞の拡大のためのプロトコルを提示する。プロトコルは、16時間の腫瘍抗原の不在でbryostatin-1/ionomycin（B / I）とIL – 2によるT細胞の活性化が含まれています。 B / Iの活性化は細胞内シグナルを模倣してそのそれぞれ4、プロテインキナーゼC活性および細胞内カルシウムを増加させることによりT細胞活性化の結果。無関係なT細胞を殺すことながら、このプロトコルは、特に腫瘍特異的T細胞を活性化。 B / I -活性化T細胞は、24時間のIL – 7およびIL – 15で培養し、IL – 2でパルスされています。 24時間後、T細胞を洗浄し、スプリット、および追加の4日間+ IL – 15 IL – 7で培養した。 ex vivoで拡大T細胞の腫瘍特異性と抗腫瘍効果が決定されます。
Protocol
Discussion
エフェクターの抗腫瘍機能を持つ選択的腫瘍反応性の拡張性T細胞は、B / Iの活性化と生体外での拡張ガンマ鎖のサイトカインとIL – 2、IL – 7およびIL – 15を使用して提案されたプロトコルによって達成することができます。 IL – 2は、抗原特異的T細胞の分化と拡張をサポートすることができるT細胞増殖因子である一方、IL – 7はT細胞のアポトーシスを阻害し、拡張中にその生存をサポート?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHのR01 CA104757グラント（MH Manjili）によってサポートされていました。我々は感謝VCUマッシーがんセンターの支援とがん研究のための連邦基金を認めます。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
References
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