一个有效率的制度中的一个基因的结构和功能分析<em>体外</em>脾B淋巴细胞的文化描述。这种方法需要利用一个辅助的自由,ecotrophic包装细胞系的重组逆转录病毒的生产。稳定,遗传兴趣在初级淋巴细胞基因的表达,是实现领导在接受类开关重组的B细胞表面抗体的生成。
在真核细胞基因的转基因表达是一个功能强大的反向遗传学方法,在其中一个感兴趣的基因是异源表达系统的控制下表达,以方便所产生的表型分析。这种方法可以用来在生物体中发现一个不正常的基因表达,表达了一个基因产物的突变形式,或过度表达的基因产物的显性负形式。它是造血系统的研究,转录调控是一个主要控制机制,在发展和分化的B 细胞在2-4审查,特别有用。
小鼠遗传学是研究人类基因和疾病的有力工具。一个小鼠和人类基因组的比较分析,揭示了共线性的保护,在超过90%的基因组5此外,在小鼠模型所使用的技术是适用于人类基因的研究,例如, 基因 干扰和等位基因更换6。然而,转基因小鼠的建立需要一个很大的金融和技术性质资源。有几个项目已经开始编译库(KOMP,EUCOMM,NorCOMM)敲除小鼠品系或突变引起的菌株(理研),这需要大规模的努力和合作 7的。因此,这是可取的,首先研究的一个发展的小鼠模型前,在原代细胞的细胞培养模型所需的基因表型。
逆转录病毒的DNA整合到宿主DNA中,最好内或附近转录单位或CpG岛,稳定和遗传利益打包基因的表达,同时避免转录沉默 8 9。然后下一个高效率的逆转录病毒启动子控制转录的基因,在转录和蛋白质的生产效率高。因此,逆转录病毒表达可用于难转染的细胞,细胞在有丝分裂过程中的一个活跃的状态。由于该病毒的结构基因内包装细胞系中,用于克隆感兴趣的基因的表达载体含有病毒没有结构基因,这既消除了病毒的回复的可能性,并增加了安全与病毒上清工作如没有传染性的病毒粒子产生的 10 。
在这里,我们提出了一个脾B细胞重组逆转录病毒的生产和后续感染的协议。隔离后,刺激培养的脾细胞与钍派生淋巴因子和抗CD40,诱导B细胞的增殖和分化 11爆裂。此协议是为年底发生在B细胞发育和分化,B细胞是从以下初始造血事件,但在抗原刺激诱导浆细胞分化的脾孤立的事件研究的理想。
这里描述和图1描绘的逆转录病毒转导的脾B细胞是一种遗传性的方法,是在B淋巴细胞的研究非常有用,因为许多lymphopoesis发展的事件是由转录调控1 ,2控制。 ,在B细胞的成熟,通过CD40L的触发,后期是诱导B细胞生长,进入细胞周期, 和增殖11,20所必需的。 如图2所示,B细胞可以在体外刺激抗CD40和IL – 4,经过这一阵扩散,逆转录病毒载体的功能在B细胞?…
The authors have nothing to disclose.
CK是由哥伦比亚大学的研究生课程。 UB是白血病和淋巴瘤协会的美国,从白血病研究基金会的收件人的新研究者奖的研究员,是由哥伦比亚大学新进教师启动经费支持。