Summary

Ein 96-well Mikrotiterplatte-basierten Methode zur Überwachung der Formation und antimykotische Empfindlichkeitsprüfung von Candida albicans Biofilme

Published: October 21, 2010
doi:

Summary

Wir beschreiben eine einfache, schnelle und robuste Methode für die Bildung von<em> Candida albicans</em> Biofilmen mit 96 well Mikrotiterplatten und seinen Nutzen in antimykotische Empfindlichkeitsprüfung von Zellen in Biofilmen.

Abstract

Candida albicans bleibt die häufigste Ursache von Pilzinfektionen in einem expandierenden Bevölkerung gefährdet Patienten und Candidiasis ist jetzt das dritte häufigste Infektion in US-Krankenhäusern. Unterschiedliche Erscheinungsformen von Candidiasis sind mit Biofilmbildung, sowohl auf dem Host-Gewebe und / oder medizinische Geräte (zB Katheter) verbunden. Biofilmbildung führt negativen klinischen Folgen, wie Zellen innerhalb des Biofilms von der Host-Immunantwort und durch die Einwirkung von Antimykotika sind geschützt. Wir haben eine einfache, schnelle und robuste In-vitro-Modell für die Bildung von C entwickelt albicans Biofilmen mit 96 well Mikrotiterplatten, die auch für Biofilm antimykotische Antibiogramm eingesetzt werden können. Die Anzeige dieses Tests kolorimetrisch, basierend auf der Reduktion von XTT (a Tetrazoliumsalz) durch metabolisch aktive Pilz Biofilm-Zellen. Ein typisches Experiment dauert ca. 24 h für die Bildung von Biofilmen, mit einer zusätzlichen 24 h für antimykotische Empfindlichkeitsprüfung. Aufgrund seiner Einfachheit und die Verwendung von allgemein verfügbaren Labor-Materialien und Geräte, demokratisiert diese Technik Biofilm-Forschung und stellt einen wichtigen Schritt in Richtung Standardisierung der antimykotischen Empfindlichkeitstestung von Pilzen Biofilmen.

Protocol

1. Vorbereitung von C. albicans C. albicans ist ein Risk Group 1/BSL1 Mikroorganismus. Denken Sie daran, gute aseptische / sterile Techniken für die Arbeit die Verwendung mit diesem Mikroorganismus und folgen institutionellen Verfahren für die ordnungsgemäße Entsorgung von biologischem Risikomaterial. Bereiten Sie eine Übernachtkultur von C. albicans in YPD (Yeast Peptone Dextrose) flüssigen Medium durch Animpfen einer Einzelkolonie von C. albi…

Discussion

Hier beschreiben wir eine einfache, schnelle, kostengünstige und hoch reproduzierbare 96-well Mikrotiterplatte Modell für die Bildung von Candida Biofilmen mit einer kolorimetrischen Methode, die die Stoffwechselaktivität der Zellen Maßnahmen innerhalb des Biofilms mit XTT gekoppelt. Diese 96-well Mikrotiterplatte Modell für die Bildung von Biofilmen wurde ursprünglich für C entwickelt albicans, aber auch für andere Candida spp verwendet werden. und einfach für andere pilzlic…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biofilm-bezogenen Arbeit im Labor wird durch Zuschüsse finanziert nummeriert R21DE017294 und R21AI080930 vom National Institute of Dental & Craniofacial Forschung und dem Nationalen Institut für Allergien und Infektionskrankheiten (zum JLL-R.). Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Meinung der NIDCR, die NIAID oder die NIH.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Sabouraud-dextrose agar   Becton Dickinson 211584 To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates
YPD: Yeast peptone dextrose   US Biological Y2076 Medium for propagation of overnight liquid cultures
RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine   Cellgro 50-020-PB Liquid medium for biofilm formation
Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS)   Fisher BP308 To buffer RPMI 1640
Phosphate buffered saline, PBS   Sigma P4417 Buffer for washes
XTT sodium salt   Sigma X4251 See above for preparation instructions
Ringer’s lactate   Hospira NDC0409-7953-09 For preparation of XTT solution
Menadione   Sigma M5625 Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion
Petri dishes   Fisher 08-757-12  
15 ml conical centrifuge tubes   Corning 430790  
50 ml conical centrifuge tubes   Corning 430828  
96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated   Corning 3595  
Multichannel pipette and tips   Eppendorf    
Incubator   Any    
Microtiter plate reader   Any    

References

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Cite This Article
Pierce, C. G., Uppuluri, P., Tummala, S., Lopez-Ribot, J. L. A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms. J. Vis. Exp. (44), e2287, doi:10.3791/2287 (2010).

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