У насекомых, oenocytes производить кутикулярных углеводородных соединений. Эти соединения защищают от высыхания и способствовать химической связи. Здесь мы показываем, рассечение техника, используемая для изоляции от взрослых oenocytes<em> Дрозофилы</em>, И показать, как этот препарат может быть использован для исследования генов, участвующих в синтеза углеводородов.
В<em> Дрозофилы</em>, Как и в других насекомых, восковой слой на внешней поверхности кутикулы, состоит преимущественно из углеводородных соединений, обеспечивает защиту от высыхания и других экологических проблем. Некоторые из этих кутикулярных углеводородных (ХГС) соединений также функционировать как semiochemical сигналов, и в этом качестве посредника феромонов связи между членами одного и того же вида, или в некоторых случаях между различными видами, и влиять на поведение. Специализированные клетки называют oenocytes рассматриваются в качестве основной площадки для синтеза ХГС. Тем не менее, относительно мало известно об участии oenocytes в регуляции биосинтеза, транспорта и осаждения путей способствует выход ХГС. Учитывая значительную роль, которую играют в CHCs некоторые аспекты биологии насекомых, в том числе химические связи, высыхание сопротивление, и иммунитет, важно, чтобы получить более глубокое понимание молекулярных и генетических регулировании производства ХГС в этих специализированных клеток. Взрослый oenocytes из<em> D. MELANOGASTER</em> Находятся в брюшной кожного покрова, и метамерно одетые в ленточных кластеров излучающих вдоль внутренней кутикулярной поверхности каждого сегмента брюшка. В этом видео статье мы демонстрируем рассечение техника, используемая для подготовки oenocytes от взрослых<em> D. MELANOGASTER</em>. В частности, мы предоставляем подробные шаг за шагом демонстрации (1), как готовить филе взрослых<em> Drosophila</em> Живота, (2) как определить oenocytes и различать их от других тканей, и (3), как удалить нетронутыми oenocyte кластеров из брюшной оболочкой. Краткие экспериментальные иллюстрации того, как этот препарат может быть использован для изучения экспрессии генов, вовлеченных в синтез углеводородных включен в стоимость. Расчлененный подготовки продемонстрировали здесь позволит подробная молекулярно-генетический анализ oenocyte функции во взрослой плодовой мухи.
В этом видео статье мы представляем подробный протокол вскрытия для подготовки oenocytes от взрослых D. MELANOGASTER в порядке, подходящем для молекулярного анализа. Сокращенные текстовые счет вскрытия метод был описан в другом месте 2, и в результате oenocyte Препарат был продемонстриров?…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы поблагодарить Amsale страховки за ее помощь в съемках этого видео статьи. Эта работа финансировалась CIHR, NSERC и КПР гранты ЛЗЕ.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Sylgard | Dow Corning | |||
Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |