Dissection של Oenocytes מן למבוגרים תסיסנית melanogaster</em
Summary
בשנת חרקים, oenocytes לייצר תרכובות פחמימנים cuticular. תרכובות אלו להגן מפני התייבשות ולאפשר תקשורת כימית. כאן אנו להפגין טכניקה לנתיחה להשתמש כדי לבודד את oenocytes מן הבוגרים<em> תסיסנית melanogaster</em>, וכן להדגים כיצד זה הכנה יכול להיות מנוצל ללימוד גנים המעורבים בסינתזה פחמימנים.
Abstract
בתוך<em> תסיסנית melanogaster</em>, כמו חרקים אחרים, שכבת שעווה על המשטח החיצוני של לציפורן, המורכב בעיקר תרכובות פחמימנים, מספק הגנה מפני יובש אתגרים סביבתיים אחרים. כמה תרכובות פחמימנים אלה cuticular (CHC) מתפקדים גם אותות semiochemical, וככזה לתווך תקשורת המושכת בין בני אותו מין, או במקרים מסוימים בין מינים שונים, להשפיע על התנהגות. תאים מיוחדים המכונים oenocytes נחשבים האתר הראשי לסינתזה CHC. עם זאת, יחסית מעט מאוד ידוע על מעורבות של oenocytes בוויסות של biosynthetic, תחבורה מסלולים בתצהיר לתרום פלט CHC. בהתחשב תפקיד משמעותי כי CHCs לשחק במספר היבטים של הביולוגיה חרקים, כולל תקשורת כימית, עמידות התייבשות, חסינות, חשוב להשיג הבנה טובה יותר של התקנה מולקולרית הגנטי של ייצור CHC בתוך תאים מיוחדים אלה. Oenocytes הבוגרת<em> ד melanogaster</em> נמצאים בתוך integument הבטן, והם ערוכים metamerically בסרט כמו אשכולות מקרין על פני השטח cuticular הפנימי של כל פלח הבטן. במאמר זה אנו וידאו להפגין טכניקה לנתיחה להשתמש להכנת oenocytes מן הבוגרים<em> ד melanogaster</em>. במיוחד, אנו מספקים הפגנה מפורט צעד אחר צעד (1) איך להכין פילה מבוגר<em> תסיסנית</em> הבטן, (2) כיצד לזהות את oenocytes ו להבחין בינם לבין רקמות אחרות, ו (3) כיצד להסיר oenocyte אשכולות שלמים מן integument הבטן. האיור ניסיוני קצר של איך זה הכנה ניתן להשתמש כדי לבחון את הביטוי של גנים המעורבים סינתזה פחמימנים כלול. הכנת גזור הפגינו בזאת תאפשר ניתוח מולקולרי גנטי מפורט של הפונקציה oenocyte של זבוב הפירות הבוגרים.
Protocol
Discussion
במאמר זה אנו מציגים וידאו פרוטוקול לנתיחה מפורט להכנת oenocytes מן הבוגרים ד melanogaster באופן מתאים לניתוח מולקולרית. מבוססי טקסט חשבון מקוצר של השיטה לנתיחה תוארה במקומות אחרים 2, והכנת oenocyte וכתוצאה מכך הודגמה להיות מתאים החילוץ של שניהם RNA וחלבון 2. באמצעות …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות Amsale זוזו על סיועה הצילומים של מאמר זה וידאו. עבודה זו מומנה על ידי CIHR, NSERC ומענקים CRC כדי JDL.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetics. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
