Em insetos, o oenocytes produzir compostos de hidrocarbonetos cuticulares. Estes compostos protegem contra a dessecação e facilitar a comunicação química. Aqui nós demonstramos uma técnica de dissecção usado para isolar o oenocytes de adultos<em> Drosophila melanogaster</em>, E ilustram como esta preparação pode ser utilizada para estudar os genes envolvidos na síntese de hidrocarbonetos.
Em<em> Drosophila melanogaster</em>, Como em outros insetos, uma camada de cera na superfície externa da cutícula, composta principalmente de compostos de hidrocarbonetos, oferece proteção contra a dessecação e outros desafios ambientais. Vários compostos destes hidrocarbonetos cuticulares (CHC) também funcionam como sinais semiochemical, e como tal mediar comunicações pheromonal entre os membros da mesma espécie, ou em alguns casos, entre espécies diferentes, e influenciam o comportamento. Células especializadas referido como oenocytes são considerados como o principal local para a síntese de CHC. No entanto, pouco se sabe sobre o envolvimento do oenocytes na regulação da biossíntese, transporte e vias de deposição de contribuir para a saída de CHC. Dado o papel significativo que CSCs jogar em vários aspectos da biologia de insetos, incluindo a comunicação química, resistência à dessecação, e imunidade, é importante para obter uma maior compreensão da regulação molecular e genética da produção CHC dentro dessas células especializadas. O oenocytes adultos de<em> D. melanogaster</em> Estão localizados dentro do tegumento abdominal, e são metamerically vestida de fita-como grupos irradiando ao longo da superfície interna cuticular de cada segmento abdominal. Neste artigo vídeo que demonstrar uma técnica de dissecção utilizado para a preparação de oenocytes de adultos<em> D. melanogaster</em>. Especificamente, nós fornecemos uma demonstração passo a passo detalhado de (1) como filé de preparar um adulto<em> Drosophila</em> Abdômen, (2) como identificar as oenocytes e discerni-los de outros tecidos, e (3) como remover intacta aglomerados oenocyte do tegumento abdominal. Uma breve ilustração experimental de como esta preparação pode ser usado para examinar a expressão de genes envolvidos na síntese de hidrocarboneto é incluído. A preparação dissecados demonstrado aqui irá permitir a análise detalhada molecular e genética da função oenocyte na mosca da fruta adulto.
Neste artigo de vídeo apresenta um protocolo de dissecação detalhada para a preparação do oenocytes do adulto D. melanogaster de forma adequada para a análise molecular. Um texto baseado em abreviado em conta o método de dissecação tem sido descrito em outros lugares 2, ea preparação resultando oenocyte demonstrou ser adequado para a extração de RNA e proteínas 2. Usando essa preparação também pode ser possível desenvolver métodos para a cultura de oenocytes explantado. …
The authors have nothing to disclose.
Gostaríamos de agradecer Amsale Belay por sua ajuda nas filmagens deste artigo vídeo. Este trabalho foi financiado pela CIHR, NSERC e subvenções para CRC JDL.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Sylgard | Dow Corning | |||
Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |