Summary

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Published: November 28, 2010
doi:

Summary

Per studiare<em> In vivo</em> La crescita tumorale e microambiente tumorale, abbiamo utilizzato un modello murino singenici e ortotopico di carcinoma ovarico negli animali immunocompetenti. Noi trasdotte un tumore linea di topi cellule (MOV1) con una proteina fluorescente Katushka (MOV1<sup> KAT</sup>) E qui vi mostriamo il suo impianto ortotopico in ovaio e<em> In vivo</em> Immagini.

Abstract

Background: Il cancro ovarico è generalmente diagnosticato in fase avanzata in cui il caso / rapporto di mortalità è alta e rimane quindi il più letale di tutte le neoplasie ginecologiche tra Stati Uniti le donne 1,2,3. Tumori sierosi sono le forme più diffuse di cancro ovarico e 4,5 il Tg-MISIIR-Tag transgenici rappresenta l'unico modello del mouse che si sviluppa spontaneamente questo tipo di tumori. Tg-MISIIR-Tag topi esprimere SV40 regione trasformando sotto il controllo del Mulleriani inibitori della sostanza di tipo II Receptor (MISIIR) del gene promotore 6. Ulteriori linee transgeniche sono state identificate che esprimono il transgene TAG SV40, ma non sviluppano tumori ovarici. Topi inclini non tumorali mostrano tipica vita per C57BL / 6 topi e sono fertili. Questi topi possono essere utilizzate come riceventi trapianto allogenico di singenici per le cellule tumorali isolate dai Tg-MISIIR-Tag-DR26 topi.

Obiettivo: Sebbene l'imaging del tumore è possibile 7, la diagnosi precoce dei tumori in profondità è una sfida in animali che vivono di piccole dimensioni. Per abilitare studi preclinici in un modello animale immunologicamente intatta per il cancro ovarico sieroso, si descrive un modello di topo singenici per questo tipo di tumore ovarico che permette di imaging in vivo, gli studi del microambiente tumorale e tumore risposte immunitarie.

Metodi: Per prima cosa deriva a + TAG cancro linea di topi cellule (MOV1) da un tumore ovarico spontanee raccolte in un 26 settimane di età DR26-Tg MISIIR-Tag femminile. Poi, abbiamo MOV1 cellule trasdotte stabilmente con TurboFP635 vettore Lentivirus mammiferi che codifica Katushka, un far-rosso mutante della proteina fluorescente rossa dal mare anemone Entacmaea quadricolor con eccitazione / emissione di massimi a 588/635 nm 8,9,10. Noi ortotopicamente impiantato MOV1 Kat nell'ovaio 11,12,13,14 della non-tumorale inclini Tg-MISIIR-Tag topi femmina. Progressione del tumore è stata seguita da in vivo imaging ottico e microambiente tumorale è stata analizzata mediante immunoistochimica.

Risultati: ortotopicamente MOV1 impiantato cellule Kat sviluppato tumori ovarici sierosi. MOV1 Kat tumori possono essere visualizzate da imaging in vivo fino a tre settimane dopo l'impianto (fig. 1) e sono stati infiltrati con leucociti, come osservato nei tumori ovarici umani 15 (fig. 2).

Conclusioni: descrivere un modello ortotopico di carcinoma ovarico adatto per imaging in vivo di tumori presto a causa della elevata pH stabilità e fotostabilità di Katushka nei tessuti profondi. Proponiamo l'utilizzo di questo modello romanzo singenici del carcinoma ovarico sieroso per gli studi di imaging in vivo e il monitoraggio dei tumori risposte immunitarie e le immunoterapie.

Protocol

1. Colture Cellulari Prima dell'iniezione ortotopico, cultura MOV1 cellule Kat, derivate da tumori DR26, in un pallone T175 fino a quando non sono al 90% confluenti. Prevede di utilizzare 1-5.000.000 cellule per iniezione, che richiede 1 o 2 T175 fiaschi. Il giorno della iniezione, raccogliere le cellule e determinare il numero delle cellule utilizzando un emocitometro. Una volta che la concentrazione cellulare è stata determinata, agglomerare le cellule per centrifugazione…

Discussion

Chirurgia e iniezioni ortotopico

Iniezione ortotopico in borsa ovarica esigenze di formazione e di precisione. Così

  1. In caso di scarsa esperienza chirurgica, la pratica di cadaveri per primo.
  2. Usare preferibilmente donne multipare (uno o due cucciolate), come si sviluppano più grandi ovaie nel tempo che facilita l'iniezione e la sopravvivenza aumentano confrontare con le femmine nullipare.
  3. A causa delle piccole dimensioni della borsa ovarica del mouse, l&#3…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), il NIH concedere CA016520 / TAPITMAT (NS), il finanziamento privato da parte della Fondazione Claneil (NS), e il ovarico SPORE concedere FCCC e la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) e il Fox Chase Cancer Center core Grant (P30 CA06927) (DCC). Gli autori ringraziano l'ottima assistenza tecnica dello strumento ottico Core / bioluminescenza diretto dal Dr. EJ Delikatny presso la University of Pennsylvania, Anthony Secreto dalle cellule staminali e Core dello xenotrapianto diretto dal Dott. G. Danet-Desnoyers presso la University of Pennsylvania Cancer Centro per la SNC formazione tecnica di iniezione ortotopica e Denada Dangaj presso l'Università della Pennsylvania / OCRC per assistere sulla chirurgia.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM-GLUTAMAX   Invitrogen 10564-011  
PBS   Gibco 14040  
Versene   Lonza 17-711E  
Heating pad   Deltaphase 39 DP  
Povidone pads   Dynarex 1108  
Alcohol pads   Fisher 06-669-62  
Artificial tears ointment   Phoenix Pharma., Inc. 17845-153  
Ketoprofen   Fort Dodge laboratories    
3cc/insulin syringe   BD 309301  
Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)   Syneture 9612-31  
Tissue adhesive   Vetbond 3M  
Vet Bactrim/ oral suspension   Hi-tech Pharmacal 840823  
IVIS-Lumina   Caliper lifesciences    
Isofluorane   Phoenix Pharma., Inc. J108013  
Fetal Bovine Serum, Qualified   Invitrogen 10437036  
Penicillin/streptomycin   Gibco 15140  
TurboFP635 mammalian vector   Evrogen FP721  
T175 flasks   cellstar 660-190  

References

  1. Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
  2. Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
  3. Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
  4. Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
  5. Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
  6. Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
  7. Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
  8. Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
  9. Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
  10. Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
  11. Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
  12. Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
  13. Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
  14. Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
  15. Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).

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Cite This Article
Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses. J. Vis. Exp. (45), e2146, doi:10.3791/2146 (2010).

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