Om te studeren<em> In vivo</em> Tumorgroei en tumor micro-omgeving, hebben we gebruik gemaakt van een syngene en orthotope muismodel van eierstokkanker bij immunocompetente dieren. We getransduceerde een muis tumor cellijn (MOV1) met Katushka fluorescerend eiwit (MOV1<sup> KAT</sup>) En hier tonen we de orthotope implantatie in eierstok-en<em> In vivo</em> Beeldvorming.
Achtergrond: Eierstokkanker is over het algemeen gediagnosticeerd in een vergevorderd stadium waar de zaak / sterfte-verhouding hoog is en dus blijft de meest dodelijke van alle gynaecologische maligniteiten onder Amerikaanse vrouwen 1,2,3. Sereuze tumoren zijn de meest voorkomende vormen van kanker van de eierstokken en 4,5 van de Tg-MISIIR-Tag transgene is de enige muis model dat zich spontaan ontwikkelt dit type tumoren. Tg-MISIIR-Tag muizen express SV40 transformeren gebied onder controle van de Müller groeiremmende stof type II Receptor (MISIIR) gen promoter 6. Extra transgene lijnen geïdentificeerd die uitdrukken van de SV40 TAg transgen, maar ontwikkelen geen ovariële tumoren. Niet-tumor gevoelig muizen vertonen typische levensduur voor C57Bl / 6 muizen, en zijn vruchtbaar. Deze muizen kunnen worden gebruikt als syngene transplantaat ontvangers voor tumor cellen geïsoleerd uit Tg-MISIIR-tag-DR26 muizen.
Doelstelling: Hoewel tumor beeldvorming mogelijk is zeven, de vroege opsporing van diepe tumoren is een uitdaging in kleine levende dieren. Om de pre-klinische studies in een immunologisch intact diermodel voor sereuze eierstokkanker, beschrijven we een syngene muismodel voor deze vorm van eierstokkanker, dat vergunningen in vivo beeldvorming, studies van de tumor micro-omgeving en de tumor immuunrespons.
Methoden: We hebben eerst afgeleid een TAG + muis kanker cellijn (MOV1) van een spontane ovariële tumor geoogst in een 26 weken oude DR26 Tg-MISIIR-Tag vrouw. Dan hebben we stabiel MOV1 cellen getransduceerd met TurboFP635 lentivirus zoogdieren vector die codeert voor Katushka, een ver-rood mutant van de rode fluorescerende eiwit uit zee-anemoon Entacmaea quadricolor met excitatie / emissie maxima bij 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically geïmplanteerd MOV1 Kat in de eierstok 11,12,13,14 van niet-tumor gevoelig Tg-MISIIR-Tag vrouwelijke muizen. Tumorprogressie werd gevolgd door in vivo optische beeldvorming en de tumor micro-omgeving werd geanalyseerd door immunohistochemie.
Resultaten: Orthotopically geïmplanteerde MOV1 Kat cellen ontwikkeld sereuze ovariële tumoren. MOV1 Kat tumoren zouden kunnen worden gevisualiseerd door in vivo beeldvorming tot drie weken na de implantatie (fig. 1) en werden geïnfiltreerd met leukocyten, zoals waargenomen in de menselijke eierstokkanker 15 (fig. 2).
Conclusies: We beschrijven een orthotope model van eierstokkanker die geschikt zijn voor in vivo beeldvorming van vroege tumoren als gevolg van de hoge pH-stabiliteit en fotostabiliteit van Katushka in diepe weefsels. Wij stellen het gebruik van deze roman syngene model van sereuze eierstokkanker voor in vivo beeldvormend onderzoek en monitoring van de tumor immuunrespons en immuuntherapie.
Chirurgie en orthotope injecties
Orthotope injectie in de eierstokken bursa vraagt training en precisie. Dus
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door de NIH subsidie P01 AI 068.730 (SNC, NS), het NIH subsidie CA016520 / TAPITMAT (NS), de private financiering van de Claneil Foundation (NS), en de ovariële SPORE verlenen aan FCCC en de University of Pennsylvania ( P50 CA83638) en het Fox Chase Cancer Center Core Grant (P30 CA06927) (DCC). De auteurs danken de uitstekende technische bijstand van de Optische / Bioluminescentie Core Facility onder leiding van dr. EJ Delikatny aan de Universiteit van Pennsylvania, Anthony Secreto uit de Stem Cell en xenograft Core onder leiding van dr. G. Danet-Desnoyers aan de Universiteit van Pennsylvania Kanker centrum voor de opleiding van SNC tot orthotope injectietechniek en Denada Dangaj aan de Universiteit van Pennsylvania / OCRC voor de ondersteuning van de operatie.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
PBS | Gibco | 14040 | ||
Versene | Lonza | 17-711E | ||
Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
T175 flasks | cellstar | 660-190 |