Личинки дрозофилы обеспечивают идеальную модель системы для исследования механизмов аксонального транспорта в личиночной сегментарных нервов. Используя эту процедуру, 3-й возраста личинок проведения различных мутаций можно сравнить с диким личинки типа.
Abstract
Дрозофилы становится мощной системой модель для изучения развития и функционирования нервной системы, особенно из-за его удобного генетики и полностью секвенированы генома. Кроме того, личиночной нервной системы является идеальной системой моделью для изучения механизмов аксонального транспорта, а личиночные сегментарные нервы содержат пучки аксонов с их клеточных тел, расположенных в мозге и их нервными окончаниями конец по всей длине тела. Здесь мы опишем процедуру для визуализации белков синаптических пузырьков в личиночной сегментарные нервы. Если все сделано правильно, все компоненты нервной системы, а также связанные тканей, таких как мышцы и NMJs, остается целой, неповрежденной, и готовы быть визуализированы. 3-го возраста личинки перевозки различных мутаций рассеченные, фиксированной, инкубировали с антителами синаптических пузырьков, визуализации и по сравнению с диким типом личинки. Эта процедура может быть адаптирована для различных синаптические или нейронные антител и изменения в распределении различных белков может быть легко наблюдается в течение личиночной сегментарные нервы.
Protocol
1. Подготовка реагентов Приготовьте 1х Dissection буфера с использованием 128 мМ NaCl, CaCl 2 4 мм, 4 мм MgCl 2, 2 мМ KCl, 5 мМ HEPES и 36 Сахароза. PH решение до 7,2 и фильтр стерилизуют. Подготовка фиксатором использованием 1:01 разбавления 16% формальдегида и 1x буфера Dissection. Приготовьте 1…
Discussion
Дрозофилы личиночной сегментарные нервы мощная система для изучения механизмов в аксонального транспорта. Если 3-го возраста личиночной рассечение выполняется правильно, все компоненты ЦНС, ПНС, и связанные с ними тканей, таких как мышцы и NMJs, могут быть рассмотрены в рамках…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG поддерживается за счет средств из государственного университета Нью-Йорка в Буффало и от Джона Р. Oishei Foundation.
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).