Drosophila melanogaster larven zorgen voor een ideaal modelsysteem om de mechanismen van het axonaal transport te onderzoeken binnen de larvale segmentale zenuwen. Met behulp van deze procedure, kan 3 e instar larven dragen verschillende mutaties worden vergeleken met wild-type larven.
Abstract
Drosophila melanogaster is in opkomst als een krachtige modelsysteem voor het bestuderen van de ontwikkeling en functie van het zenuwstelsel, met name vanwege de gunstige genetica en volledig gesequenced genoom. Bovendien, het larvale zenuwstelsel is een ideaal modelsysteem om de mechanismen van axonaal transport studie als het larvale segmentale zenuwen bevatten bundels van axonen met hun cellichamen gelegen in de hersenen en hun zenuwuiteinden eindigen langs de lengte van het lichaam. Hier beschrijven we de procedure voor de visualisatie van synaptische vesicles eiwitten in larvale segmentale zenuwen. Indien correct gedaan, alle componenten van het zenuwstelsel, samen met de omliggende weefsels, zoals spieren en NMJs, blijven intact, onbeschadigd, en klaar om te worden gevisualiseerd. 3 e instar larven voeren verschillende mutaties worden ontleed, vaste, geïncubeerd met synaptische blaasje antilichamen, gevisualiseerd en vergeleken met wild type larven. Deze procedure kan worden aangepast voor verschillende synaptic of neuronale antilichamen en veranderingen in de verdeling van een verscheidenheid van eiwitten kunnen gemakkelijk worden waargenomen binnen de larvale segmentale zenuwen.
Protocol
1. Voorbereiding van de reagentia Bereid 1x Dissection buffer met 128 mM NaCl, 4mm CaCl 2, 4mm MgCl 2, 2 mM KCl, 5mM HEPES en 36mm Sucrose. PH de oplossing voor 7.2 en filteren steriliseren. Bereid het fixatief met behulp van 01:01 verwatering van 16% formaldehyde en 1x Dissection Buffer. Bereid 1x PBT met 1x fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) bij een pH van 7,2 en Triton X-100 in een 1:100 verhouding. Bereid 5% Bovine Serum Albumine (BSA) met 0,01% Na A…
Discussion
De Drosophila larvale segmentale zenuwen zijn een krachtig systeem om mechanismen in axonaal transport te bestuderen. Als de 3 e instar larven dissectie correct wordt uitgevoerd, kan alle componenten van het CZS, PNS, en de bijbehorende weefsel, zoals de spieren en NMJs, worden onderzocht binnen een enkele larve. We hebben aangepast dit protocol bij het ene gepubliceerd door Hurd en Saxton (1996). Dit protocol kan ook worden aangepast aan andere neuronale antistoffen te testen, maar optimalisatie van…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG wordt ondersteund door middelen van de State University van New York in Buffalo en van John R. Oishei Foundation.
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).