カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）によって誘発される調節不全遺伝子を特定
Summary
宿主細胞因子がカポジ肉腫（KS）の確立と維持において重要な役割を果たす。我々は、KSHV感染DMVEC細胞に、とKS腫瘍組織に改変宿主細胞因子を特定する方法の概要を示します。ウイルスによって変更さ細胞の遺伝子は、新規な治療のための潜在的なターゲット（複数可）として機能します。
Abstract
現在、KSは、南部アフリカで最も優勢なHIV / AIDS関連悪性腫瘍であり、それゆえ世界。1,2は、それが血管内皮細胞のangioproliferative腫瘍として特徴付けられると胸水のリンパ腫の形態では珍しいB細胞リンパ増殖性疾患（PEL）を生成と多中心性キャッスルマン病のいくつかの形態が。KSの細胞の 3〜5 1〜5％が積極的にカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）、KSに関連付けられている病原体の溶菌複製をサポートしている病変、それは細胞因子が必要があることは明らかです。発癌と腫瘍の進行の過程におけるウイルス因子と相互作用。KS病理学に寄与する6,7の識別小説ホスト因子の決定要因は、KSの治療のための新たな治療薬を開発するなど、同様に腫瘍の進行や転移の予後マーカーを開発するために不可欠です。 dysregulated遺伝子をマイクロアレイ解析により識別されれば8付属のビデオの詳細我々はKSHV感染後、KS腫瘍組織における皮膚微小血管内皮細胞（DMVEC）に変更された宿主細胞の遺伝子発現プログラムを識別するために使用するメソッドは9、タンパク質発現の変化はイムノブロットおよびデュアルラベル付け免疫蛍光法によって確認した。調節不全の遺伝子の転写発現の変化を定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（定量RT – PCR） により in vitro で確認されています。アーカイブKS腫瘍組織を用いた in vitroの結果での検証は、デュアル標識した免疫化学と組織マイクロアレイによって実行されます。8,10我々のアプローチは、in vitroで 、その後、in vivoモデル系での開発ができるようになりますKS腫瘍組織の微小環境での調節不全遺伝子を特定するKSの治療のための潜在的な新規治療薬の発見と評価。
Protocol
Discussion
このレポートで使用されている手法は、実験室のさまざまな設定で行うことができます。彼らはいくつかの特別な機器やコア施設へのアクセスが必要です。 biosafteyレベル3（BSL – 3）施設の使用が必要な場合がありますKSHVのような感染性ウイルス性病原体が関与する実験を行うときに適切な予防措置が取られている必要があります。組織の買収は、適切な制度審査委員会（IRBの）によって承認…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は彼のアドバイスとこの原稿の見直しのためにジェームズEKヒルドレス、メハリー医科大学を、感謝。我々はまた、原稿の編集にダイアナマーバーに感謝。エイズの健康格差研究センター、NIHの助成金5U54 RR019192 – 05;臨床研究のためのメハリーセンター、NIHグラントP20RR011792、この作品は、エイズ研究のためのメハリーヴァンダービルトセンター（NIHの助成金P30 AI054999 – 05）によってサポートされ、NIHで助成金P01 CA113239。 DJAは部分的にエイズ研究のためのヴァンダービルト – メハリーセンター（CFAR）と臨床研究のためのメハリーセンター（CRC）からのパイロットの補助金によって賄われていた。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Invitrogen | 05-0001DJ | ||
| TPA | Sigma | P1585 | ||
| PBS pH 7.4 | Invitrogen | 10010-023 | ||
| Sodium butyrate | Sigma | 19364 (FLUKA) | ||
| EBM-2 media | Lonza | CC-3156 | + bullet kits supplement | |
| DMVEC cells (HMVEC) | Lonza | CC2543 | ||
| Fetal calf serum | Hyclone | SH30066.03 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Chamber slides | Nalgene | 154461 | ||
| KSHV LANA Mab | Vector Labs | VP-H913 | 1:50 dilution/IFA | |
| Galectin-3 goat pAb | R&D Systems | AF1154 | ||
| Donkey-anti-goat FITC | Jackson ImmunoRessearch | 705-095-1 | ||
| Donkey-anti-goat Rho | Jackson ImmunoRessearch | 705-295-003 | 1:100 dilution/IFA | |
| Mounting media | Vector Labs | H 1500 | Vectashield with DAPI | |
| BCA Protein Assay Kit | Pierce | 23235 | ||
| Nitrocellulose | Bio-Rad | 161-0112 | ||
| Donkey-anti-goat-conj. | Santa Cruz | SC 2020 | ||
| Western substrate | Pierce | 34075 | ||
| Biotin-rabbit-anti goat | DAKO | 305-065-045 | ||
| AP-Strepavidin conj. | DAKO | K 0492 (kit) | ||
| RNase DNase Free Set | Qiagen | 79254 | ||
| MJ Mini Cycler | Bio-Rad | PTC-1148C | ||
| Bio-Photometer | Eppendorf | 952000006 | ||
| RC 6 Plus Centrifuge | Sorvall | 46910 | ||
| Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge | Beckman | 392052 | ||
| MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System | Bio-Rad | 170-9770 | ||
| TE 2000S Fluorescent microscope | NIKON | TE2000S | ||
| 2100 Bioanalyzer | Agilent | G2938C | ||
| Eclipse E 200 | NIKON | E 200 | ||
| Sorvall Legend RT Centrifuge | Thermo | 75004377 |
References
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