Summary

Inducción transuretral de infección del tracto urinario ratón

Published: August 05, 2010
doi:

Summary

Este video se muestran los métodos para inducir transuretral infecciones del tracto urinario ratón y cuantificar la extensión de las infecciones resultantes.

Abstract

Cepas bacterianas uropatógena de interés se cultivan en agar. En general, los uropatógenos<em> E. coli</em> (UPEC) y otras cepas pueden ser cultivadas durante la noche en Luria-Bertani (LB) de agar a 37 ° C en el aire ambiente. Cepas UPEC crecer como colonias de color blanco amarillento translúcido en LB agar. Tras la confirmación de la morfología de las colonias apropiadas, las colonias solo entonces se escogió para ser cultivadas en caldo. Caldo de LB se pueden utilizar para la mayoría de cepas bacterianas uropatógenos. Dos culturas de serie, la noche de caldo de LB se pueden emplear para aumentar la expresión de pili de tipo I, un factor de virulencia bien definidas para las bacterias uropatógenos. Caldos de cultivo se diluye a la concentración deseada en tampón fosfato salino (PBS). De ocho a 12 semanas de edad ratones hembra se colocan bajo anestesia con isoflurano y transuretral inoculadas con las bacterias mediante tubos de polietileno cubiertas de 30 jeringas de calibre. Inóculos típico, el cual debe ser determinada empíricamente para cada combinación de cepas bacterianas / ratón, son 10<sup> 6</sup> A 10<sup> 8</sup> UFC por ratón de 10 a 50 microlitros de PBS. Tras el periodo de infección deseado (un día a varias semanas), las muestras de orina y la vejiga y los riñones tanto se cosechan. Cada órgano es picado, colocado en PBS, y se homogeneizaron en un homogeneizador Bala Azul. Homogeneizados de orina y el tejido se diluyen en serie en PBS y se cultivaron en agar apropiado. Al día siguiente, las unidades formadoras de colonias se cuentan.

Protocol

I. Preparación de sondas uretrales Para cada uno de vejiga y los riñones del ratón para el muestreo, lugar 5-6 gotas de acero inoxidable (vejiga, el tamaño de 1,6 mm o de 0,9 a 2,0 mm mezcla) o granos de óxido de circonio (de los riñones, el tamaño de 0,5 mm) en un tubo de criovial, respectivamente. Autoclave de los tubos de cuentas que contienen. Después de los tubos de enfriar a temperatura ambiente, añadir 200 microlitros de PBS estéril a cada cordón de acero inoxidable que contiene el…

Discussion

La inducción de la infección del tracto urinario del ratón mediante la inoculación de bacterias transuretral es un procedimiento de larga data, pero técnicamente exigente 11. Colgado y Hultgren ha publicado recientemente una excelente revisión de las técnicas transuretral de infección del tracto urinario del ratón 13. En este trabajo, se intenta ilustrar los puntos más importantes de este enfoque experimental.

Los principiantes pueden practicar su técnica med…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Los autores desean agradecer a Shelly Xie y Jennifer Payne por su asistencia técnica de expertos. Este trabajo fue posible gracias a donaciones de la Sociedad de Urología Pediátrica y el Fondo de Stanford Pediatric Research.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps)   E&K Scientific 640201  
Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring   E&K Scientific 440011-N  
Bullet Blender   Next Advance BBX24  
Zirconium Oxide Beads (0.5mm)   Next Advance ZROB05  
Stainless Steel Beads (1.6mm)   Next Advance SSB16  
Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm)   Next Advance SSB14B  
CBA/J Mice, 8-12 week old female   Jackson Laboratories 000656  
Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM)   EMD EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4)  
LB agar        
LB broth   EMD 1.10285.0500  
Isoflurane (Aerrane)   Baxter NDC 10019-773-60  
Inoculating loops   Fisher Scientific 22-363-601  
Eosin-methylene blue (EMB) agar powder   Himedia Laboratories MM022-500G  
MacConkey agar powder   Difco 212123  
LB agar powder   Difco 244520  
Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)]   BD Biosciences 427401  
30 gauge needles, 1/2 inch   BD Biosciences 305106  
1 ml tuberculin Slip-Tip syringe   BD Biosciences 309602  
3 ml Luer-Lock syringe   BD Biosciences 309585  

References

  1. Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
  2. Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
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  13. Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).

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Cite This Article
Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection. J. Vis. Exp. (42), e2070, doi:10.3791/2070 (2010).

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