Induzione transuretrale di infezioni del tratto urinario mouse
Summary
Questo video dimostra metodi per indurre transurethrally infezioni del tratto urinario del mouse e quantificare l'entità delle infezioni che ne derivano.
Abstract
Uropatogeni ceppi batterici di interesse vengono coltivate su agar. In generale, uropatogeni<em> E. coli</em> (UPEC) e altri ceppi possono essere coltivate pernottamento a Luria-Bertani (LB) agar a 37 ° C nell'aria ambiente. Ceppi UPEC crescere come colonie traslucido bianco-giallastro su agar LB. In seguito alla conferma della morfologia delle colonie del caso, singole colonie vengono poi raccolte per essere coltivate in brodo. LB brodo può essere utilizzato per i ceppi batterici più uropatogeni. Due porte seriali, pernottamento culture brodo LB può essere impiegato per migliorare l'espressione di tipo I pili, un ben definito fattore di virulenza dei batteri uropatogeni. Culture brodo sono diluiti alla concentrazione desiderata in tampone fosfato (PBS). Da otto a 12 settimane i topi vecchi femminile sono posti sotto anestesia isoflurano e transurethrally inoculato con batteri utilizzando tubi di polietilene coperto di siringhe 30 gauge. Inoculi tipico, che deve essere empiricamente determinato per ogni combinazione ceppo batterico / mouse, sono 10<sup> 6</sup> A 10<sup> 8</sup> Ufc per mouse in 10-50 microlitri di PBS. Dopo il periodo di infezione desiderato (un giorno a diverse settimane), i campioni di urina e la vescica ed entrambi i reni vengono raccolte. Ogni organo è tritato, posto in PBS, e omogeneizzato in un omogeneizzatore proiettile blu. Omogenati di urina e di tessuto sono serialmente diluiti in PBS e coltivate su agar appropriato. Il giorno successivo, unità formanti colonie sono contate.
Protocol
Discussion
Induzione di infezioni del tratto urinario del mouse tramite l'inoculazione di batteri transuretrale è una procedura ormai consolidata, ma tecnicamente impegnativo 11. Hung e Hultgren recentemente pubblicato un eccellente rassegna di tecniche transuretrale di infezione del tratto urinario del mouse 13. In questo lavoro, cerchiamo di illustrare ulteriormente i punti più fini di questo approccio sperimentale.
I novizi possono praticare la loro tecnica eseguendo una …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare Shelly Xie e Jennifer Payne per la loro assistenza tecnico esperto. Questo lavoro è stato reso possibile attraverso sovvenzioni da parte della Società di Urologia Pediatrica e lo Stanford Research Pediatric Fondo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
References
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