Canlı hücre Görüntüleme ve Kantitatif Analiz Embriyonik Epitel Hücreleri Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus embriyonik epitel, epitel morfolojilerinden sırasında kutup geliştirme ve şekil değişikliği gibi hücre davranışlarını incelemek için ideal bir model sistem . Geleneksel sabit örnekleri histoloji giderek canlı hücre konfokal görüntüleme tarafından tamamlanmaktadır. Burada, kurbağa dokularda izole ve canlı hücre konfokal mikroskopi kullanılarak canlı epitel hücreleri ve hücre iskeletinin görselleştirmek için yöntemler göstermektedir.
Abstract
Embriyonik epitel hücreleri çok hücresel dokularda hücre yüzey alanı ve hücre yüksekliği değişiklikleri gibi kendi geometri değişiklikler, tabi burada morfolojilerinden okumak için ideal bir model olarak hizmet ve hücrelerin mitoz geçiren ve göç. Ayrıca, epitel hücreleri komşu dokulara morfogenetik hareketleri düzenleyen olabilir<sup> 1</sup>. Epitel hücre ve dokuların çalışmak için geleneksel yöntem, kimyasal sabitleme ve hücre morfolojisi veya ilgi, özellikle proteinlerin lokalizasyonu belirlemek için histolojik yöntemler içerir. Bu yaklaşımlar yararlı olabilir ve hücre şekilleri ve mimari dokusu "anlık görüntülerini" sağlamak için devam ediyor, ancak çok çeşitli proteinler hareket ya da belirli pozisyonlara lokalize nasıl hücreler, özel şekiller elde, ne yollar hücreler nihai doğru takip nasıl anlaşılması gerekmektedir. farklılaştırılmış kaderi. Yüksek çözünürlüklü canlı görüntüleme, geleneksel yöntemlerle tamamlar ve aynı zamanda çok hücreli epitel yaprak oluşumu, bakım ve morfolojilerinden katılan dinamik hücresel süreçlere daha doğrudan soruşturma sağlar. Burada hayvan kap dokuların izolasyon deneysel yöntemler göstermektedir<em> Xenopus laevis</em> Birlikte epitel morfolojilerinden moleküler ve hücresel çalışmalar artırabilir. Epitel hücreleri ve basit ölçüm yaklaşımları konfokal görüntüleme embriyo.
Protocol
Discussion
Biz apikal hücre korteks ve Xenopus embriyolar epitel hücrelerinin hücre zarlarının salınan görüntü dinamik olarak değişen hücre iskeletinin laboratuvar düzenli olarak kullanılan deneysel protokolleri sundu. Bu protokolün optimizasyonu şarttır ve bazı ayarları bir mikroskop sistemi türüne bağlı olarak değişir ve proteinler bir tür görüntüleme ile ilgilenen; Bir epitel hücre şekilleri canlı görüntüleme için bir başlangıç noktası olarak bu protokoller kullanmanız ger…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (R01-HD044750), Ulusal Bilim Vakfı KARİYER hibe ve Amerikan Kalp Derneği (Başlangıç Hibe-in-Aid) destek tarafından desteklenmiştir. HY Kim, M. von Dassow ve J. Zhou (günlük laboratuvarı sorumlulukları ile ilgili yardım için) ve Lin Zhang, moleküler biyoloji ve sentezleme mRNA ona yardım için: Yazarlar Davidson Lab üyelerine teşekkür ederiz. Biz yıllar boyunca çeşitli yöntemler geliştirilmesi ve test ederek, bu protokol kısmı katkıda bulunmuştur kurbağa laboratuarları (özellikle Ray Keller ve Doug DeSimone) deneysel çabaları kabul etmiş oluyorsunuz. Richard Harland ve John Wallingford sırasıyla mem-GFP ve moesin-GFP plazmid tür hediyeler için teşekkür ederiz.
References
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
