Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.
Abstract
Embrionárias células epiteliais servir como um modelo ideal para estudar a morfogênese em tecidos multicelulares sofrer alterações em sua geometria, tais como mudanças na área da superfície celular e altura da célula, e onde as células sofrem mitose e migram. Além disso, as células epiteliais também podem regular os movimentos morfogenéticos em tecidos adjacentes<sup> 1</sup>. Um método tradicional para estudar células epiteliais e tecidos envolvem fixação química e métodos histológicos para determinar a morfologia das células ou localização de proteínas de interesse particular. Estas abordagens continuar a ser úteis e proporcionam "instantâneos" de formas celulares e arquitetura do tecido, no entanto, ainda há muito a ser entendido sobre como as células adquirem formas específicas, como várias proteínas mover ou localizar a posições específicas, e que caminhos seguir células em direção a seus finais destino diferenciado. De alta resolução de imagem ao vivo complementa os métodos tradicionais e também permite uma investigação mais direta para os processos dinâmicos celulares envolvidos na formação, morfogênese, manutenção e de folhas epiteliais multicelulares. Aqui demonstramos métodos experimentais do isolamento dos tecidos cap animal de<em> Xenopus laevis</em> Embriões para imagem confocal de células epiteliais e abordagens de medição simples, que em conjunto podem aumentar os estudos moleculares e celulares da morfogênese epitelial.
Protocol
Discussion
Nós apresentamos protocolos experimentais usados regularmente em nosso laboratório para citoesqueleto imagem dinamicamente mudando no córtex celular apical e oscilantes membranas celulares das células epiteliais em embriões Xenopus. Deve-se usar estes protocolos como ponto de partida para geração de imagens ao vivo de formas de células epiteliais; otimização deste protocolo é essencial e algumas das configurações irá mudar, dependendo do tipo de sistema de microscópio tem uma e do tipo de p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por um dos Institutos Nacionais de Saúde (R01-HD044750), uma doação de CARREIRA do National Science Foundation e apoio da American Heart Association (Começando Grant-in-aid). Os autores agradecem membros Davidson Lab: HY Kim, M. e J. von Dassow Zhou (para ajudar com as responsabilidades do laboratório por dia), e Lin Zhang por sua assistência em biologia molecular e síntese de mRNA. Reconhecemos os esforços experimentais de todos os laboratórios de sapo (especialmente Ray Keller e Doug DeSimone), que têm contribuído para alguma parte deste protocolo, através do desenvolvimento e teste de vários métodos ao longo dos anos. Agradecemos a Richard Harland and John Wallingford para os presentes o seu tipo de mem-GFP e GFP moesin-plasmídeos, respectivamente.
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