生細胞イメージングとの胚上皮細胞の定量分析アフリカツメガエル</em
Summary
アフリカツメガエル胚上皮は、上皮形態形成時の極性の開発と形状の変化などの細胞の挙動を研究する理想的なモデルシステムです。固定試料の伝統的な組織は、ますます生細胞の共焦点イメージングによって補完されています。ここでは、カエルの組織を分離し、生きた細胞の共焦点顕微鏡を使用して、ライブ上皮細胞とその細胞骨格を可視化する方法を示しています。
Abstract
胚上皮細胞は多細胞組織がそのような細胞表面の面積とセルの高さの変化など、その形状の変化を、受ける場所形態形成を研究する理想的なモデルとして機能し、細胞が有糸分裂を経て、移行先。さらに、上皮細胞は、隣接する組織に形態形成の動きを規制することができます<sup> 1</sup>。上皮細胞や組織を研究する従来の方法は、化学固定し、細胞形態や関心のある特定のタンパク質の局在を決定するために組織学的方法を含む。これらのアプローチは有用であると、セルの形状と組織のアーキテクチャの"スナップショット"を提供し続ける、しかし、多くの様々なタンパク質が移動したり、ローカライズ特定の位置に、そしてどのような経路の細胞はそれらの最終的な方向に続くか、細胞が特定の図形を取得する方法について理解されたまま差別化された運命。高解像度ライブイメージングは、従来の方法を補完するものであり、また多細胞上皮シートの形成、維持、および形態形成に関わるダイナミックな細胞プロセスへのより直接的な調査が可能です。ここでは、からアニマルキャップの組織の分離から実験方法を示す<em>アフリカツメガエル</em>一緒に上皮形態形成の分子や細胞の研究を強化することができます上皮細胞との単純な測定手法の共焦点イメージングに胚。
Protocol
Discussion
我々は、頂端細胞の皮質とアフリカツメガエル胚における上皮細胞の細胞膜を振動さで画像を動的に変化する細胞骨格に私たちの研究室で定期的に使用される実験的なプロトコルを提示している。一つは、上皮細胞の形状のライブイメージングのための出発点として、これらのプロトコルを使用する必要がありますが、このプロトコルの最適化が不可欠であるとの設定のいくつかは1つ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立衛生研究所（R01 – HD044750）、国立科学財団からのキャリアグラント、および米国心臓協会（補助金の開始）からの支援によって支えられている。分子生物学および合成mRNAの彼女の援助のためにHY金、M.フォンDassowとJ.周（毎日研究室の責任のヘルプのための）、および林張：著者は、Davidsonのラボのメンバーに感謝。我々は、長年にわたって様々な方法を開発し、テストすることにより、このプロトコルの一部に寄与しているすべてのカエルラボ（特にレイケラーのとダグDeSimoneさん）から実験的な努力を認めます。我々は、それぞれMEM – GFPとモエシン- GFPプラスミドのその親切なギフトのためにリチャードハーランドとジョンウォリングフォードに感謝。
References
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
