Мама уникальный Magnetosome связанные белок, который был показан на участие в magnetosome активации. Здесь мы представляем очистки протокол Мама удаления мутант (MamAΔ41) от<em> М. magneticum</em> AMB-1.
Чувствительный к магнитному полю бактерии составляют разнообразную группу водных микроорганизмов, которые способны ориентироваться вдоль геомагнитного поля. Такое поведение, как полагают, чтобы помочь их поиск подходящих сред<em> (1)</em>. Эта возможность предоставляется путем magnetosome, субклеточных органелл, который состоит из линейно-цепочки сборки липидных везикул каждый из которых способен biomineralize и приложить ~ 50-нм кристаллов магнетита или greigite. Основополагающим направлением magnetosome, что было показано, что необходимые для формирования функциональных везикул мама. Мама очень обильные magnetosome связанного белка, который является одним из наиболее характерно magnetosome белков, связанных с<em> В естественных условиях</em><em> (2-6)</em>. Эта статья посвящена очистке мама, которая, несмотря на изучаемой<em> В естественных условиях</em>, Нет четкого функциональные или структурные детали были определены для него. Биоинформатика анализ показал, что мама тетра-tricopeptide повторить (ТПВ), содержащих белок. TPR является структурным мотивом найти как такового или входящих в состав больше раза в широком спектре белков, она служит в качестве шаблона для белок-белковых взаимодействий и является посредником мульти-белковых комплексов<em> (7)</em>. TPRS принимают участие во многих важных задач в эукариотических клеточных процессов органелл и многие бактериальные пути<em> (8-14).</em> Для того, чтобы понять, мама, уникальные TPR содержащие белок, высоко очищенного белка требуется в качестве первого шага. В этой статье мы представляем очистки протокол для стабильной Мама удаления мутант (MamAΔ41) от<em> М. magneticum</em> AMB-1.
Белки очистки является основным шагом в любом белков биохимические или структурные исследования. С каждого белка уникальна своим собственным поведением, нужно определить его свойства и изменить его очистки соответственно. Белка-мишени должны быть проанализированы как первый шаг на ?…
Мы признаем, д-р Амир Ахарони за поддержку и Геула Давыдов, Ноам Гримберг и Чэнь Гутман за их советы и комментарии.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
French Press | Equipment | Thermo scientific | FA-078A | |
Pressure cell | Equipment | Thermo scientific | FA-032 | |
Ultra-centrifuge | Equipment | Sorvall | Discovery 90SE | |
Rottor | Equipment | Beckman | Ti60 | |
Ultra-centrifuge tubes; PC-Bottle+Cap Assay 26.3ml | Equipment | Beckman | BC-355618 | |
2.5cm diameter, Glass Econo-Column Chromatography Columns | Equipment | BioRad | 737-2521 | |
Ni-NTA His Bind resin | Equipment | Novagen | M0063428 | |
Spectrophotometer | Equipment | Amersham Biosiences | Ultraspec 2100 pro | |
Quartz cuvette | Equipment | Hellma | 104-QS | |
Fast Performance Liquid Chromatography- AKTA purifier 10 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 28-4062-64 | |
Ion exchange column – MonoQ 4.6/100 PE | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 10025543 | |
Size exclusion pre-packed column-HiLoad 26/60 Superdex 200 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 17-1071-01 | |
Centricon – Vivaspin15 – 10,000 MWCO | Equipment | Sartorius Stedim Biotech GmbH | VS1501 | |
Table centrifuge | Equipment | Thermo scientific | IEC CL30R | |
MALDI-TOF | Equipment | Bruker Daltonics | Reflex IV | |
Tris-HCl (hydrotymethyl) aminomethane | Reagent | BioLab | 20092391 | |
Sodium Chloride | Reagent | FRUTROM | 235553470 | |
Imidazole | Reagent | Alfa Aesar | 288-32-4 | |
EDTA free protease inhibitors cocktail | Reagent | Sigma | P-8849 | |
Dnase I (Deoxyribonuclease I) | Reagent | Sigma | DN-25 | |
Bovine Thrombin | Reagent | Fisher BioReagents | BP25432 | |
Glycine | Reagent | BioLab | 07132391 | |
Soudim Dodecyl Sulfate (SDS) | Reagent | BioLab | 19822391 | |
Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M-3148 | |
InstantBlue | Reagent | Expedeon | 1SB01L | |
PageRuler Prestained Protein Ladder | Reagent | Fermentas | SM0671 |