妈妈是一个独特的磁相关蛋白被证明是参与磁激活。在这里,我们从目前的妈妈缺失突变体的净化协议(MamAΔ41)<em> M。 magneticum</em> AMB – 1。
磁细菌组成的水生微生物,能够沿着地磁场的方向不同群体。这种行为被认为是帮助他们寻找合适的环境<em>(1)</em>。这种能力是由磁赋予的,一个细胞内的细胞器,包含一个线性链大会脂质囊泡每个能够biomineralize,并附上了〜50纳米磁铁矿或胶黄铁矿晶体。一个原则的功能囊泡的形成,被证明是需要的磁组件是妈妈。妈妈是一个非常丰富的磁相关的蛋白质,这是最特征的磁相关蛋白之一<em>在体内</em><em>(2-6)</em>。本文的重点,在妈妈的净化,尽管正在研究<em>在体内</em>,没有明确的功能或结构细节已经确定了它。生物信息学分析表明,妈妈是一个四tricopeptide重复(TPR),含蛋白质。 TPR是在广泛的蛋白质折叠的一部分,或形成一个结构基序,它可作为蛋白质相互作用,介导的多蛋白质复合物的模板<em>(7)</em>。 TPRS参与许多重要的任务,在真核细胞的细胞器的进程和许多细菌途径<em>(8-14)。</em>为了理解妈妈,一个独特的TPR,含有蛋白质,高度纯化的蛋白质是必需的第一步。在这篇文章中,我们目前为一个稳定的妈妈缺失突变体的净化(MamAΔ41)协议<em> M。 magneticum</em> AMB – 1。
蛋白质纯化的生化或在任何蛋白质结构研究的主要步骤。由于每个蛋白质独特的是与自己的行为,需要定义其属性,并相应修改其净化。分析蛋白质的目标应该是,作为对使用净化生物信息学工具的第一步。它们被用来计算目标ISO电点,评估其需要减少/氧化环境,它需要特殊的离子/配体。我们的协议中有几个关键的修改反映了目标的独特性。这些修改包括缓冲区,工作温度和列调整。
<p class=…我们承认对他的支持和对他们的建议和意见,诺姆Grimberg Geula达维多夫和陈格特曼博士阿米尔Aharoni。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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French Press | Equipment | Thermo scientific | FA-078A | |
Pressure cell | Equipment | Thermo scientific | FA-032 | |
Ultra-centrifuge | Equipment | Sorvall | Discovery 90SE | |
Rottor | Equipment | Beckman | Ti60 | |
Ultra-centrifuge tubes; PC-Bottle+Cap Assay 26.3ml | Equipment | Beckman | BC-355618 | |
2.5cm diameter, Glass Econo-Column Chromatography Columns | Equipment | BioRad | 737-2521 | |
Ni-NTA His Bind resin | Equipment | Novagen | M0063428 | |
Spectrophotometer | Equipment | Amersham Biosiences | Ultraspec 2100 pro | |
Quartz cuvette | Equipment | Hellma | 104-QS | |
Fast Performance Liquid Chromatography- AKTA purifier 10 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 28-4062-64 | |
Ion exchange column – MonoQ 4.6/100 PE | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 10025543 | |
Size exclusion pre-packed column-HiLoad 26/60 Superdex 200 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 17-1071-01 | |
Centricon – Vivaspin15 – 10,000 MWCO | Equipment | Sartorius Stedim Biotech GmbH | VS1501 | |
Table centrifuge | Equipment | Thermo scientific | IEC CL30R | |
MALDI-TOF | Equipment | Bruker Daltonics | Reflex IV | |
Tris-HCl (hydrotymethyl) aminomethane | Reagent | BioLab | 20092391 | |
Sodium Chloride | Reagent | FRUTROM | 235553470 | |
Imidazole | Reagent | Alfa Aesar | 288-32-4 | |
EDTA free protease inhibitors cocktail | Reagent | Sigma | P-8849 | |
Dnase I (Deoxyribonuclease I) | Reagent | Sigma | DN-25 | |
Bovine Thrombin | Reagent | Fisher BioReagents | BP25432 | |
Glycine | Reagent | BioLab | 07132391 | |
Soudim Dodecyl Sulfate (SDS) | Reagent | BioLab | 19822391 | |
Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M-3148 | |
InstantBlue | Reagent | Expedeon | 1SB01L | |
PageRuler Prestained Protein Ladder | Reagent | Fermentas | SM0671 |