엄마가 magnetosome 활성화에 참여하는 표시되었습니다 독특한 Magnetosome 관련된 단백질이다. 여기에서 엄마가 삭제 돌연변이의 정화 프로토콜 (MamAΔ41)을 제시<em> M. magneticum</em> AMB – 1.
Magnetotactic 박테리아는 지자기의 필드 함께 스스로를 동쪽을 향하게 수 있습니다 수생 미생물의 다양한 그룹을 구성. 이 문제는 적합한 환경에서 검색을 돕기 위해 생각됩니다<em> (1)</em>. 이 기능은 magnetosome에 의해 수여됩니다 지질의 선형 체인 어셈블리로 구성되어 subcellular organelle은 자철광 또는 greigite의 ~ 50 나노미터 크리스탈 biomineralize하고 묶으에 각 수 vesicles. 기능 vesicles의 형성에 필요한 것으로 표시되었다 magnetosome의 주요 구성 요소가 마마입니다. 엄마가 가장 특징 magnetosome – 관련 단백질 중 하나입니다 매우 풍부한 magnetosome – 관련 단백질입니다<em> 생체내에</em><em> (2-6)</em>. 이 문서는, 엄마의 정화에 초점을 맞추고있는 연구 임에도 불구하고<em> 생체내에</em> 더 명확한 기능이나 구조 자세한 사항은 그것을 발견되지 않았습니다. 생물 정보학 분석 엄마가 단백질을 포함하는 테트라 – tricopeptide 반복 (TPR)입니다 것을 제안했습니다. TPR은 단백질의 다양한 큰 접어 이러한이나 성형 일환으로 발견 구조적 모티프이며, 그것은 단백질 – 단백질 상호 작용과 mediates 다중 단백질 단지에 대한 템플릿 역할<em> (7)</em>. TPRs는 진핵 세포 organelle 프로세스와 많은 세균 경로에 많은 중요한 작업에 참여<em> (8-14).</em엄마 이해하기> 위해서는 단백질을 포함하는 독특한 TPR은 매우 정제된 단백질은 첫 단계로 필요합니다. 이 문서에서는, 우리는에서 안정적인 엄마를 삭제 돌연변이 (MamAΔ41)에 대한 정화 프로토콜을 제시<em> M. magneticum</em> AMB – 1.
단백질 정제는 생화학 단백질이나 구조 연구의 주요 단계입니다. 각각의 단백질 자체 동작과 독특한 있기 때문에 하나의 속성을 정의하고 이에 따라 그 정화를 수정해야합니다. 단백질 대상은 생물 정보학 도구를 사용하여 정화위한 첫 단계로 분석을해야합니다. 그들은 대상 ISO – 전기 지점을 계산 환경 및 특수 이온 / 리간드에 대한 필요성을 감소 / 산화에 대한 필요성을 평가하는 데 사용됩니?…
우리는 그들의 조언과 의견을 자신의 지원과 Geula 다비도프, 노암 Grimberg와 첸 박사 Guttman에 대한 아미르 Aharoni을 인정합니다.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
French Press | Equipment | Thermo scientific | FA-078A | |
Pressure cell | Equipment | Thermo scientific | FA-032 | |
Ultra-centrifuge | Equipment | Sorvall | Discovery 90SE | |
Rottor | Equipment | Beckman | Ti60 | |
Ultra-centrifuge tubes; PC-Bottle+Cap Assay 26.3ml | Equipment | Beckman | BC-355618 | |
2.5cm diameter, Glass Econo-Column Chromatography Columns | Equipment | BioRad | 737-2521 | |
Ni-NTA His Bind resin | Equipment | Novagen | M0063428 | |
Spectrophotometer | Equipment | Amersham Biosiences | Ultraspec 2100 pro | |
Quartz cuvette | Equipment | Hellma | 104-QS | |
Fast Performance Liquid Chromatography- AKTA purifier 10 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 28-4062-64 | |
Ion exchange column – MonoQ 4.6/100 PE | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 10025543 | |
Size exclusion pre-packed column-HiLoad 26/60 Superdex 200 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 17-1071-01 | |
Centricon – Vivaspin15 – 10,000 MWCO | Equipment | Sartorius Stedim Biotech GmbH | VS1501 | |
Table centrifuge | Equipment | Thermo scientific | IEC CL30R | |
MALDI-TOF | Equipment | Bruker Daltonics | Reflex IV | |
Tris-HCl (hydrotymethyl) aminomethane | Reagent | BioLab | 20092391 | |
Sodium Chloride | Reagent | FRUTROM | 235553470 | |
Imidazole | Reagent | Alfa Aesar | 288-32-4 | |
EDTA free protease inhibitors cocktail | Reagent | Sigma | P-8849 | |
Dnase I (Deoxyribonuclease I) | Reagent | Sigma | DN-25 | |
Bovine Thrombin | Reagent | Fisher BioReagents | BP25432 | |
Glycine | Reagent | BioLab | 07132391 | |
Soudim Dodecyl Sulfate (SDS) | Reagent | BioLab | 19822391 | |
Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M-3148 | |
InstantBlue | Reagent | Expedeon | 1SB01L | |
PageRuler Prestained Protein Ladder | Reagent | Fermentas | SM0671 |