A organização anatômica do cérebro dos primatas podem fornecer importantes insights sobre condições normais e patológicas nos seres humanos. Estereologia imparcial é um método para estimar com precisão e eficiência o número de neurônios total (ou outro tipo de célula) em um espaço de referência dado<sup> 1</sup>.
Abstract
O primata não-humano é uma importante espécie de translação para a compreensão dos processos normais de funcionamento e as doenças do cérebro humano. Estereologia imparciais, o método aceito como o estado-da-arte para a quantificação de objetos biológicos em cortes de tecido<sup> 2</sup>, Gera dados confiáveis estruturais para os recursos biológicos no cérebro de mamíferos<sup> 3</sup>. Os componentes-chave da abordagem são imparciais (aleatória sistemática) de amostragem de estruturas anatomicamente definidos (espaços de referência), combinado com a quantificação de números de celular e comprimentos de fibra tamanho e capilar, superfícies, volumes regionais e distribuição espacial de objetos biológicos dentro do espaço de referência<sup> 4</sup>. Entre as vantagens dessas abordagens sobre os métodos estereológicos anterior é a prevenção de todas as fontes conhecidas de erro sistemático (não aleatória) decorrentes de pressupostos errôneos e não verificáveis modelos. Este estudo documenta uma aplicação biológica de estereologia computadorizado para estimar o total da população neuronal no córtex frontal do cérebro do macaco vervet (<em> Chlorocebus aethiops sabeus</em>), Com a ajuda de dois programas estereologia comercialmente disponíveis, Ciências da Vida e BIOQUANT Stereologer (Figura 1). Além de contraste e comparação dos resultados de ambos os BIOQUANT e<em> Stereologer</em> Sistemas, este estudo fornece um protocolo detalhado para o<em> Stereologer</em> Sistema.
Protocol
Parte 1: Pré-processamento de tecido deve ser feito de acordo com Burke et al. (2009) 5. Resumidamente, o tecido deve ser bem perfundidos com paraformaldeído, glutaraldeído ou formalina. Isto pode ser conseguido através de perfusão transcardial padrão normalmente utilizado para a colheita de outros órgãos. No presente estudo o assunto estava profundamente sedado com cloridrato de cetamina (10 mg / kg, im), sacrificados com uma overdose de pentobarbital sódico (25 mg / kg, iv) e perfundidos…
Discussion
Estereologia imparcial em um cérebro de primatas é semelhante ao de outras amostras biológicas. No entanto, dado o tamanho do cérebro dos primatas, um plano de tratamento cuidadoso é recomendado desde um único hemisfério do macaco vervet produz mais de 1.200 seções quando cortado em 50 micra. Em primeiro lugar recomendamos stereotaxically bloqueando o cérebro em blocos de um centímetro, que fornece um plano padrão de seção entre os blocos e assuntos, minimiza seções parcial entre blocos, e fornece blocos…
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Ikiel Ptito por seu contínuo apoio técnico. NSERC conceder ao MP.
Burke, M., Zangenehpour, S., Mouton, P. R., Ptito, M. Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain. J. Vis. Exp. (27), e1262, doi:10.3791/1262 (2009).