C. Elegans Nöromüsküler Kavşağı Diseksiyon ve kayıt
Summary
Erişilebilir sinaps elektrofizyoloji Uygulama sinaptik mutantlar analiz yararlı sinaptik aktivite ölçülebilir bir ölçü, sağlar. Bu makale, nöromüsküler kavşaklar (NMJ) ortaya çıkarmak için kullanılan bir diseksiyon yöntemi açıklar<em> Caenorhabditis elegans (C. elegans)</em> Ve kısaca bu preparat uygulanabilir hangi kullandığı bazı tartışıyor.
Abstract
Nörotransmisyon nöronların hızlı bir zaman ölçeğinde, post-sinaptik hedeflere kimyasal sinyaller aracılığı ile bilgi aktarımı sürecidir. Bu karmaşık bir süreç uygun sinaptik bağlantı, elektrik sinyallerinin iletim, hedeflemesi ve sekretuar veziküller, kalsiyum algılama, vezikül füzyon, yerelleştirme ve postsinaptik reseptörler fonksiyonu emişli sağlamak için çok sayıda pre-ve post-sinaptik proteinlerin koordineli faaliyet gerektirir ve nihayet, geri dönüşüm mekanizmaları. Sinirbilimciler olarak bu adımların her biri işlevi gören proteinler aydınlatmak ve eylem mekanizmaları anlamak için bizim hedefimizdir. Sinapsların elektrofizyolojik kayıtlar sinaptik iletimi sırasında meydana gelen elektriksel olayların altında yatan okumak ölçülebilir sağlar. Moleküler ve genetik araçlar güçlü dizisi ile C sinaptik proteinlerin işlemek için bu tekniği birleştirerek elegans, sinaptik iletim meydana gelen fonksiyonel değişiklikler analiz edebilirsiniz.
C. elegans motor nöronlar ve vücut duvarı kasları kontrol hareket, bu nedenle, bu sinaps 1 koordinasyonsuz lokomotor fenotipleri (unc olarak da bilinir) ile mutantları sık sık karıştırmayı sinaptik iletim arasında oluşan NMJs. Unc mutantlar bakteriyel bir besin kaynağı zengin bir kaynağı muhafaza olduklarından, yemek yedikten bazı faringeal pompalama yeteneği korumak gibi uzun süre canlı kalır. Bu gerçeği ile birlikte bu C. elegans çift cinsiyetli olarak var, onları ayrıntılı çiftleşme davranışları gerek kalmadan mutant döl geçmesine izin verir. Bu öznitelikler, son NMJs 2,3,7 tam olarak nasıl unc mutantlar etkisi nörotransmisyon adresi olan bu mükemmel bir model organizma solucanlar kayıt yeteneği ile birleştiğinde.
Diseksiyon yöntemi cyanoacrylic NMJs açığa solucan manikür bir kesi yapmak için bir yapıştırıcı kullanarak erişkin solucanlar hareketsizleştirir içerir. C. yılından bu yana elegans yetişkin diseksiyon diseksiyon mikroskop kullanımı ile gerçekleştirilen ve mükemmel el-göz koordinasyonu gerektiren sadece 1 mm uzunluğunda. NMJ kayıtları, tüm hücre sıkma bireyin vücut duvarı kas hücreleri ve nörotransmitter serbest voltaj elektrik stimülasyonu, ışık ile aktive olan kanal rodopsin aracılı depolarizasyon 4 ve olacak bütün bunlar Hiperozmatik tuzlu su da dahil olmak üzere çeşitli stimülasyon protokolleri kullanarak uyarılmış olabilir tarafından yapılır kısaca açıklanmıştır.
Protocol
Discussion
Genetik model organizmanın C, elegans ideal sinaptik proteinleri kodlayan genlerdeki mutasyon fonksiyonel analizi yoluyla, sinaptik iletim çalışması için uygundur. Burada C. işleyen bir diseksiyon tekniği tarif elegans elektrofizyolojik analizi için erişilebilir NMJs. Ekteki video C. kritik adımlar gösteriyor elegans diseksiyon ve sinaptik aktivitesini ölçmek için kullanılan tipik bir kayıt yapılandırma . Bu tekniği öğrenmeye büyük zorluklar teşkil ü…
Acknowledgements
Bu makale JER NIH hibe programı tarafından finanse edildi. Ben Dr. Alex Gottschalk kayıt gösterilerin birinde kullanılan kolinerjik motor nöronların kanal rodopsin ifade eden transgenik solucanlar sağlamak için teşekkür etmek istiyorum.
References
- Brenner, S. . Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Richmond, J. E., Davis, W. S., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (11), 959-959 (1999).
- Richmond, J. E. . WormBook. 1, (2006).
- Liewald, J. F., Brauner, M., Stephens, G. J. . Nature methods. 5 (10), 895-895 (2008).
- Lockery, S. R., Goodman, M. B. . Methods in enzymology. 293, 201-201 (1998).
- Brockie, P. J., Mellem, J. E., Hills, T. . Neuron. 31 (4), 617-617 (2001).
- Richmond, J. E., Jorgensen, E. M. . Nat Neurosci. 2 (9), 791-791 (1999).
