Disección y de grabación de la unión neuromuscular C. Elegans
Summary
Aplicación de la electrofisiología de las sinapsis accesibles proporciona una medida cuantificable de la actividad sináptica, útil en el análisis de mutantes sinápticos. Este artículo describe un método de disección utilizado para exponer la uniones neuromusculares (UNM) de<em> Caenorhabditis elegans (C. elegans)</em> Y discute brevemente algunos de los usos a los que se puede aplicar esta preparación.
Abstract
Neurotransmisión es el proceso por el cual las neuronas de transferencia de información a través de señales químicas para su post-sináptica objetivos, en una escala de tiempo rápido. Este complejo proceso requiere la actividad coordinada de muchas proteínas pre-y post-sináptica para garantizar la conectividad sináptica adecuada, conducción de señales eléctricas, la orientación y el cebado de las vesículas secretoras, sensibles al calcio, la localización de las vesículas de fusión, y la función de los receptores postsinápticos y, finalmente, el reciclaje, mecanismos. Como los neurocientíficos es nuestra meta para dilucidar que las proteínas funcionan en cada uno de estos pasos y comprender sus mecanismos de acción. Registros electrofisiológicos de las sinapsis proporcionar una cuantificables lectura de los hechos subyacentes eléctricos que se producen durante la transmisión sináptica. Al combinar esta técnica con el poderoso conjunto de herramientas moleculares y genéticas disponibles para manipular las proteínas sinápticas en C. elegans, podemos analizar los cambios funcionales resultantes de la transmisión sináptica.
El C. elegans NMJs formado entre las neuronas motoras y los músculos de la pared del cuerpo de control de la locomoción, por lo tanto, los mutantes con fenotipos falta de coordinación locomotriz (conocido como unc s) a menudo la transmisión sináptica en estas perturbar una sinapsis. Desde mutantes unc se mantienen en una fuente rica de una fuente de alimento de bacterias, que siguen siendo viables, siempre que conservan la capacidad de bombeo de la faringe para ingerir alimentos. Esto, junto con el hecho de que C. elegans existen como hermafroditas, les permite pasar a la progenie mutante sin la necesidad de que las conductas de apareamiento más detalles. Estos atributos, junto con nuestra capacidad para grabar los últimos de los gusanos NMJs 2,3,7 hacen de este organismo en un excelente modelo para abordar precisamente cómo unc neurotransmisión impacto mutantes.
El método de disección implica inmovilizar los gusanos adultos usando un pegamento cianoacrílico con el fin de hacer una incisión en la cutícula del gusano de la exposición del NMJs. Desde C. adultos elegans sólo 1 mm de longitud se realiza la disección con el uso de un microscopio de disección y requiere una excelente coordinación ojo-mano. Grabaciones MNJ se hacen de células enteras voltaje de sujeción individuales del cuerpo las células musculares de la pared y la liberación de neurotransmisores puede ser evocado mediante una variedad de protocolos de estimulación incluyendo la estimulación eléctrica, activado por la luz del canal-rodopsina mediada por la despolarización de 4 y solución salina hiperosmótico, todos los cuales se se describen brevemente.
Protocol
Discussion
La genética organismo modelo C elegans es ideal para el estudio de la transmisión sináptica, a través del análisis funcional de las mutaciones en genes que codifican las proteínas sinápticas. Aquí se ha descrito una técnica de disección que hace que el C. elegans NMJs accesible para el análisis electrofisiológico. El video que acompaña describe los pasos críticos en el C. elegans disección y la configuración de grabación típico utilizado para medir la actividad sináptica. Lo…
Acknowledgements
Este artículo fue financiado por el NIH subvenciones a JER. Me gustaría agradecer al Dr. Alex Gottschalk para proporcionar a los gusanos transgénicos que expresan canales de la rodopsina en las neuronas colinérgicas de motor usado en una de las manifestaciones de grabación.
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